4.4.3.1. Методика посева пищевых продуктов, не имеющих ГОСТ

4.4.3.1. Методика посева пищевых продуктов, не имеющих ГОСТ <*>.

--------------------------------

<*> В тех случаях, когда на исследуемый продукт имеется микробиологический показатель, то засевается соответствующее количество продукта (п. 4.4.1).

Первый этап. Первичные посевы на среду накопления.

Засевают 4 или более десятикратно убывающих количеств пищевого продукта, например: 10,0; 1,0; 0,1; 0,01 мл (г).

В качестве среды накопления применяют среду Кесслер с лактозой или среду КОДА. Среды разливают в пробирки не менее чем по 5 мл для посева малых объемов (1 мл, г и менее). Для посева объема от 10 мл и более среду разливают во флаконы по 50 - 100 мл (применение поплавков не обязательно). Для определения титра бактерий группы кишечных палочек засевают в среду Кесслер исходную 10-процентную взвесь в количестве 100 мл (10 г продукта) во флакон со 100 мл среды двойной концентрации, 10 мл (1 г продукта) - во флакон с 50 мл среды, 1,0 (0,1 г продукта), а также 1,0 мл из разведения 1:100 (0,01 г продукта) и т.д. - в пробирки с 5,0 мл среды. Посевы выдерживают в термостате при 37 град. C 16 - 24 часа.

Второй этап. Посев на плотную среду Эндо.

Из всех пробирок с посевами на среде Кесслер или КОДА независимо от помутнения среды, производят посевы на сектора чашек со средой Эндо (при отсутствии среды Эндо пользуются средой Левина). Для получения изолированных колоний берут петлей минимальное количество материала при значительном помутнении среды Кесслер и производят посев частым штрихом. Чашки с посевами помещают в термостат при 37 град. C на 16 - 24 часа.

Чашки с посевами на среде Эндо просматривают. При отсутствии характерных колоний на всех секторах чашки дают ответ - "титр бактерий группы кишечных палочек более 11,1". При наличии на среде Эндо колоний, характерных для бактерий группы кишечных палочек - красных с металлическим блеском или без него, розовых с темным центром, розовых, слизистых, бледно-розовых, производят их изучение <*>.

--------------------------------

<*> Лактозоотрицательные колонии (бесцветные) подвергают дальнейшему изучению для установления их возможной принадлежности к патогенным эндобактериям, для чего высевают на среду Ресселя или Олькеницкого. Последующее изучение производят в соответствии с Инструкцией о порядке расследования, учета и проведения лабораторных исследований в учреждениях санитарно-эпидемиологической службы при пищевых отравлениях, Москва, 1975.

Из изолированных колоний, характерных для бактерий группы кишечных палочек, готовят препараты, окрашивают по Граму и микроскопируют. В случае обнаружения в препарате смешанной культуры выбирают другую колонию и производят рассев на чашку со средой Эндо для получения чистой культуры. При отсутствии в мазках грамотрицательных палочек дают ответ - "титр бактерий группы кишечных палочек выше 11,1".

Заключение о наличии бактерий группы кишечных палочек только по внешнему виду колоний, без их изучения, недопустимо.

В случае обнаружения в препаратах грамотрицательных палочек исследование продолжают. Из проверенных колоний грамотрицательных палочек производят высевы на среду Гисса с глюкозой, разлитую в пробирки с поплавками. При наличии однотипных колоний грамотрицательных палочек на всех 4-х секторах чашки со средой Эндо допускается высев колоний на среду Гисса с глюкозой из двух последних секторов (разведений). Инкубация при 37 град. C 18 - 24 часа. Для ускорения анализа высевы из колоний производят в пробирки с небольшим количеством подогретой до 37 град. C среды (1,5 - 2,0 мл). Пробирки с посевами ставят в термостат при 37 град. C и просматривают через 5 - 6 часов роста. Наличие кислото- и газообразования в них указывает на присутствие бактерий группы кишечных палочек в том или ином засеянном объеме; пробирки с посевами, не забродившими через 4 - 6 часов, вновь помещают в термостат при 37 град. C и выдерживают до 16 - 24 ч.