Постановление Главного государственного санитарного врача РФ от 30.11.2007 N 80 "О надзоре за оборотом пищевых продуктов, содержащих ГМО" (вместе с "МУ 2.3.2.2306-07. 23.2. Пищевые продукты и пищевые добавки. Медико-биологическая оценка безопасности...

Таблица 3. Характеристики мышей линий СВА и С57В1/6

Таблица 3

Характеристики мышей линий СВА и С57В1/6

┌────────────────────────┬────────────────────────────────────────────────┐

│ Действующий фактор │ Линия мышей │

│ ├────────────────────────┬───────────────────────┤

│ │ СВА │ С57В1/6 │

├────────────────────────┼────────────────────────┼───────────────────────┤

│Эритроциты барана │ высокочувствительны │ низкочувствительны │

├────────────────────────┼────────────────────────┼───────────────────────┤

│Гиотамин │ не чувствительны │ чувствительны │

├────────────────────────┼────────────────────────┼───────────────────────┤

│Salmonella typhimurium │ не чувствительны │ чувствительны │

└────────────────────────┴────────────────────────┴───────────────────────┘

6.4.1. Схема проведения эксперимента

┌───────────────────────┬─────────────────────────────────────────────────┐

│Вид животных │ мыши линий СВА и С57В1/6 │

├───────────────────────┼─────────────────────────────────────────────────┤

│Пол │ самцы │

├───────────────────────┼─────────────────────────────────────────────────┤

│Возраст │ половозрелые │

├───────────────────────┼─────────────────────────────────────────────────┤

│Исходная масса тела │ 18 - 20 г │

├───────────────────────┼─────────────────────────────────────────────────┤

│Распределение по │Животных каждой линии делят на 2 группы: │

│группам │ группа "контроль" получает рацион с включением │

│ │ традиционного аналога исследуемого ГМО; │

│ │ группа "опыт" получает рацион с включением │

│ │ исследуемого ГМО │

├───────────────────────┼─────────────────────────────────────────────────┤

│Рацион <*> │Пищевая и биологическая ценность рациона │

│ │полностью удовлетворяет физиологические │

│ │потребности животных │

├───────────────────────┼─────────────────────────────────────────────────┤

│Карантин │не менее 7-ми дней │

├───────────────────────┼─────────────────────────────────────────────────┤

│Условия содержания │Животные получают свободный доступ к корму и │

│ │воде; содержатся в отапливаемом, вентилируемом │

│ │помещении │

└───────────────────────┴─────────────────────────────────────────────────┘

--------------------------------

<*> Состав базового рациона приведен в п. 6.3.2.

Исследования начинают через 21 день с момента перевода мышей на экспериментальные рационы. В течение эксперимента ведутся наблюдения за поедаемостью корма и общим состоянием животных.

6.4.2. Исследуемые показатели:

1) действие ГМО на гуморальное звено иммунитета.

Через 21 день эксперимента мышам контрольной (не менее 20 животных) и опытной (не менее 20 животных) групп обеих линий внутрибрюшинно вводят 0,5 мл эритроцитов барана (20 млн. клеток/мл). Забор крови для исследований проводится на 7-й, 14-й и 21-й день после введения эритроцитов барана. Сыворотку крови титруют в реакции гемагглютинации общепринятым методом. Полученные данные обрабатывают методами вариационной статистики с использованием t-критерия Стьюдента. Результаты приводятся в виде M +/- m, где M - выборочное среднее измеряемых величин, m - стандартная ошибка.

2) действие ГМО на клеточное звено иммунитета.

Через 21 день эксперимента мышам контрольной (не менее 15 животных) и опытной (не менее 15 животных) групп обеих линий подкожно в межлопаточную область вводят 0,5 мл эритроцитов барана (2 млн. клеток/мл). Через пять дней всем мышам в подушечку одной задней лапы вводят разрешающую дозу эритроцитов барана - 0,02 мл (1 млрд. клеток/мышь); в контрлатеральную лапу - 0,02 мл 0,95%-ного раствора хлорида натрия. Местную воспалительную реакцию оценивают через 18 - 20 часов путем определения массы опытной и контрольной лапок. Интенсивность местной реакции определяют по индексу реакции (ИР).

3) действие ГМО как сенсибилизирующего агента к гистамину.

Через 21 день эксперимента мышам контрольной (не менее 15 животных) и опытной (не менее 15 животных) групп обеих линий внутрибрюшинно вводят гистамин гидрохлорид (2,5 мг/мышь в 0,5 мл физиологического раствора). Реакцию учитывают через 24 часа по проценту гибели мышей.

4) действие ГМО на естественную резистентность мышей к S. typhimurium изучают на модели внутрибрюшинного заражения мышей десятикратно отличающимися дозами S. typhimurium штамм 415. Через 21 день эксперимента мышей контрольной (не менее 30 животных) и опытной (не менее 30 животных) групп обеих линий заражают тремя дозами культуры: 1000, 100, 10 микробных клеток/мышь. После заражения за животными наблюдают в течение 21 дня. Вычисляют ЛД50, а также процент гибели животных по каждой дозе, затем проводят сравнительный анализ результатов.

6.5. Аллергологические исследования ГМО проводятся в эксперименте на лабораторных животных: потенциальную аллергенность оценивают, определяя тяжесть протекания системной анафилаксии и уровня циркулирующих сенсибилизирующих антител (субклассов IgG1 + IgG4) у крыс, получающих в составе рациона исследуемый ГМО (группа "опыт") и его традиционный аналог (группа "контроль"). Метод основан на количественной сравнительной оценке тяжести реакции системной анафилаксии, возникающей при внутрибрюшинной (в/б) сенсибилизации взрослых крыс пищевым антигеном - овальбумином куриного яйца (ОВА) с последующим внутривенным (в/в) введением сенсибилизированным животным разрешающей дозы того же белка.

6.5.1. Схема проведения эксперимента

┌───────────────────────┬─────────────────────────────────────────────────┐

│Вид животных │ Крысы линии Вистар │

├───────────────────────┼─────────────────────────────────────────────────┤

│Пол │ Самцы │

├───────────────────────┼─────────────────────────────────────────────────┤

│Возраст │ Половозрелые │

├───────────────────────┼─────────────────────────────────────────────────┤

│Исходная масса тела │ 150 - 180 г │

├───────────────────────┼─────────────────────────────────────────────────┤

│Количество животных в │ не менее 25 особей в каждой группе │

│группе в начале │ │

│эксперимента │ │

├───────────────────────┼─────────────────────────────────────────────────┤

│Распределение по │Животных делят на 2 группы: │

│группам │ группа "контроль" получает рацион с включением │

│ │ традиционного аналога исследуемого ГМО; │

│ │ группа "опыт" получает рацион с включением │

│ │ исследуемого ГМО │

├───────────────────────┼─────────────────────────────────────────────────┤

│Рацион (табл. 4) │Пищевая и биологическая ценность рациона │

│ │полностью удовлетворяет физиологические │

│ │потребности животных. Рацион не содержит яичного │

│ │белка │

├───────────────────────┼─────────────────────────────────────────────────┤

│Карантин │не менее 7-ми дней │

├───────────────────────┼─────────────────────────────────────────────────┤

│Условия содержания │Животные получают свободный доступ к корму и │

│ │воде; содержатся в отапливаемом, вентилируемом │

│ │помещении │

├───────────────────────┼─────────────────────────────────────────────────┤

│Продолжительность │ 29 дней │

│эксперимента │ │

├───────────────────────┼─────────────────────────────────────────────────┤

│Забор материала для │ На 29-й день эксперимента │

│исследований │ │

└───────────────────────┴─────────────────────────────────────────────────┘

Таблица 2. Состав солевой смеси Таблица 4. Стандартный рацион вивария