Биопроба

3.33. Материал от пациентов с подозрением на ботулизм и материал из объектов окружающей среды подозрительный на наличие ботулотоксина исследуют с помощью биопробы на белых мышах. Обнаружение ботулинического токсина (тип токсина) служит подтверждением диагноза и делает возможным установку диагноза в ранние сроки. Биопроба на мышах считается "золотым стандартом" для обнаружения и идентификации ботулотоксина. Для обнаружения токсина исследуют образцы сыворотки крови больного, содержимое желудочно-кишечного тракта, образцы паренхиматозных органов, материал из раны, пробы пищи, фекалий или образцы из окружающей среды. Общая схема лабораторной диагностики ботулизма, направленной на выявление токсина и возбудителя представлена на рисунке 1.

3.34. Навеску гомогенизированных проб для постановки реакции нейтрализации, приготовленной по п. 3.31, после экстрагирования фильтруют через ватно-марлевый фильтр или центрифугируют при 3000 об/мин в течение 15 - 20 минут (приложение 1 к настоящим МУ). В случае анализа продуктов фильтрат делят на три части: одну из них оставляют нативной, вторую обрабатывают трипсином или панкреатином (для перевода протаксина E в токсин), третью прогревают в кипящей водяной бане в течение 30 минут. Каждым фильтратом заражают внутрибрюшинно двух белых мышей массой 16 - 20 г в количестве 0,5 мл. При наличии ботулинического токсина животные, зараженные не кипяченым фильтратом, погибают на 1 - 5 сутки с характерной клиникой ботулизма (шаткая походка, учащенное дыхание, расслабление скелетной мускулатуры, западание брюшной стенки - "осиная талия"). В случае большого содержания ботулотоксина в исследуемых образцах гибель биопробных животных может наступить через 2 часа после введения материала. Животные, которым вводили кипяченый фильтрат, остаются здоровыми.

При обнаружении в исследуемом материале токсина ставят реакцию его нейтрализации с типовыми ботулиническими сыворотками.

При отсутствии необходимости определения типовой принадлежности токсина полученные результаты являются основанием для установки диагноза - ботулизм.

Рисунок 1. Схема лабораторной диагностики ботулизма,

направленной на выявление токсина и возбудителя