Серологическое типирование токсина C. botulinum

Серологическое типирование токсина C. botulinum <31>

--------------------------------

<31> ГОСТ 10444.7-86.

3.51. Подтверждение присутствия и установление типа ботулинического токсина путем постановки реакции нейтрализации на мышах. Присутствие ботулинического токсина в ПП обнаруживают путем постановки биологической пробы на мышах с их иммунизацией противоботулиническими антитоксическими сыворотками типов A, B, E, C, D, E, F. Сыворотка типа C содержит антитоксины типов C₁ и C₂. Поливалентные сыворотки и типы поливалентных сывороток для опыта подбирают в зависимости от вида анализируемого продукта или материала и предполагаемого типа ботулинического токсина в соответствии с комбинациями и порядком, приведенными в таблицах 6 - 7.

Таблица 6

Подбор противоботулинических сывороток для типирования

ботулинических токсинов в ПП

N варианта опыта	Анализируемый продукт, материал	Типы используемых противоботулинических сывороток и их комбинации	Типы выявляемых ботулинических токсинов или их комбинации
1	Не прошедший термическую обработку	Моновалентные типов A, B, E и трехвалентная типов A, B, E	A, B, E(F) A + B + E(F)
2	Тот же, не содержащий ботулинических токсинов или их комбинаций, выявляемых по 1 варианту опыта	Моновалентная типа F	F(E)
		Моновалентная типа C	C(D)
3	Прошедший термическую обработку	Моновалентная типа A и B, бивалентная AB	A; B; A + B
4	Тот же, не содержащий типы ботулинических токсинов или их комбинаций, выявляемых по 3 варианту опыта	Моновалентная типа F	F(E)
		Моновалентная типа E	E(F)
		Моновалентная типа C	C(D)
5	Любой, не содержащий типы ботулинических токсинов или их комбинаций, выявляемых по 1 - 4 вариантам опыта	Бивалентные типы: AC	A + C(D)
		AE	A + E(F)
		AF	A + F(E)
		BC	B + C(D)
		BE	B + E(F)
		BF	B + F(E)
		CE	C(D) + E(F)
		CF	C(D) + F(E)
		EF	E + F
	Любой, не содержащий типы ботулинических токсинов или их комбинаций, выявляемые по 1 - 4 вариантам опыта	Трехвалентные типы: ABF	A + B + F(E)
		BCE	B + C(D) + E(F)
		BCF и другие	B + C(D) + F(E) и другие
		Поливалентная типа ABCEF	A + B + C(D) + E + F
6	Тот же, не содержащий типы ботулинических токсинов или их комбинаций, выявляемые по 1 - 5 вариантам опыта	Моновалентная типа D	D(C)
		Моновалентная типа G	G
		Поливалентная типов A, B, C, D, E, F	(A + B + C + D + E + F + G) и другие комбинации, в соответствии с комбинациями использованной сыворотки
Примечание: - исследование начинают с использования комбинации с наибольшим количеством типов сывороток, и в случае, если использованная комбинация типов сывороток защищает мышей от гибели, типируют ботулинические токсины моно-, би- или трехвалентными сыворотками, указанными в соответствующем варианте опыта; - в скобках указана возможная перекрестная реакция при типировании ботулинических токсинов.

3.52. Для типирования с помощью реакции нейтрализации используют противоботулинические антитоксические типоспецифические сыворотки, разведенные физиологическим раствором до концентрации 1 МЕ/мл. Разведенные сыворотки хранят при температуре плюс (4 +/- 2) °C в течение не более 10 суток. Если при использовании сывороток, разбавленных до 1 МЕ/мл, установить тип ботулинического токсина не удается, то биологическую пробу повторяют с сыворотками, разбавленными до концентрации 0,1 МЕ/мл. При использовании противоботулинических антитоксических типоспецифических сывороток, содержащих 1 МЕ/мл, ПП (и (или) ППТ) разводят буферным желатино-фосфатным раствором в соотношениях, позволяющих получить не менее трех последовательных разведений жидкости, содержащей в 10, 100 и 1000 раз меньше МЛД, чем обнаружено в ПП.

3.53. При постановке защитного теста для типирования ботулинических токсинов каждому животному внутрибрюшинно вводят по 0,5 мл моновалентной, двух-, трех- или поливалентной сыворотки. Для инъекции одного типа сыворотки или их смеси каждой группе животных применяют отдельный шприц. Через 60 минут после введения сывороток животным вводят ПП. Введение животным ПП начинают с наибольшего ее разведения, используя один шприц для группы мышей, получивших моновалентную сыворотку одного типа или двух-, трех- или поливалентную сыворотку, состоящую из одной комбинации моновалентных сывороток.

3.54. При наличии в ПП ботулинического токсина болеют и погибают с клиническими симптомами ботулинической интоксикации те мыши, которым введена сыворотка, не гомологичная типу ботулинического токсина в исходной жидкости. Погибают также мыши, которые получили гомологичную сыворотку в объеме, недостаточном для защиты от высокой дозы токсина. Мыши, получившие сыворотку, в состав которой входит моновалентная сыворотка, гомологичная типу ботулинического токсина в ПП, остаются живы.

Если болеют и погибают все животные, то биологическую пробу повторяют, применяя более разбавленную ПП или ранее не использованные комбинации моновалентных сывороток.

Определение титра ботулинического токсина Подтверждение присутствия и установление типа ботулинического токсина реакцией нейтрализации