2.1.1 Инсеминация ооцитов in vitro - экстракорпоральное оплодотворение (метод ЭКО)

Инсеминация ооцитов - метод экстракорпорального оплодотворения, заключающийся в совместном культивировании ооцитов и сперматозоидов, прошедших капацитацию in vitro.

Показатели эякулята для проведения классического ЭКО.

- Рекомендуется использовать классический метод ЭКО при нормозооспермии и умеренной патозооспермии. Уровень убедительности рекомендаций C (уровень достоверности доказательств - 4).

Комментарии: Общепризнанные критерии, по которым эякулят можно считать пригодным для классического ЭКО, на данный момент отсутствуют. Одни специалисты ориентируются на количество подвижных сперматозоидов в нативном эякуляте (более 1 x 10⁶ (138)), другие - на количество подвижных сперматозоидов в обработанной сперме (более 0,2 x 10⁶ (139) или 0,5 x 10⁶ (140)), третьи - на концентрацию и морфологию сперматозоидов в нативном образце (более 0,5 x 10⁶ морфологически нормальных, прогрессивно-подвижных сперматозоидов в миллилитре (141)).

Подготовка сперматозоидов для инсеминации.

- Для обработки спермы рекомендуется использовать такие методы, как центрифугирование в градиенте плотности и swim-up ("всплытие") (142). Уровень убедительности рекомендаций C (уровень достоверности доказательств - 4).

Комментарии: Существуют альтернативные методы обработки спермы (миграция-седиментация, фильтрация через стекловолокно, магнитная сепарация, микрожикостные камеры и др.), однако практически все они имеют существенные ограничения либо находятся на стадии апробации (143).

Процедура оплодотворения ооцитов.

- Рекомендуется выбирать время инсеминации с учетом момента введения триггера овуляции и/или пункции фолликулов (2 - 5 часов после пункции) (144). Уровень убедительности рекомендаций C (уровень достоверности доказательств - 4).

- Для процедуры инсеминации рекомендуется использовать капли со взвесью обработанных сперматозоидов с концентрацией подвижных форм в интервале от 0,1 до 0,5 x 10⁶/мл. На одну яйцеклетку должно приходиться от 10 тысяч до 50 тысяч сперматозоидов (144). Уровень убедительности рекомендаций C (уровень достоверности доказательств - 4).

- Рекомендуется проводить совместное культивирование ооцитов и сперматозоидов в течение 3 часов ("короткая инкубация"), хотя допускается традиционный вариант длительной инкубации (16 - 20 часов) (144). Уровень убедительности рекомендаций A (уровень достоверности доказательств - 1a).

Комментарии: Согласно систематическому обзору 2013 года, "короткая инкубация" имеет преимущества перед традиционной: увеличение частоты наступления клинической и продолжающейся беременности (145).

Оценка оплодотворения.

- Рекомендуется проводить оценку оплодотворения (подсчет пронуклеусов в каждой зиготе) через 16 - 20 часов после инсеминации (144). Уровень убедительности рекомендаций A (уровень достоверности доказательств - 1a).

Комментарии: Перенос эмбрионов, развивающихся из зигот с тремя и более пронуклеусами, строго запрещен. Перенос эмбрионов, развивающихся из зигот 1PN или 0PN, не рекомендован.