2.3 Биопсия бластомеров и трофэктодермы

Биопсия эмбрионов является безопасной процедурой, позволяющей провести преимплантационное генетическое тестирование (ПГТ). Достоверность результатов ПГТ напрямую зависит от качества предоставленного материала, поэтому в эмбриологических лабораториях особое внимание уделяется мерам для снижения риска контаминации тестируемых образцов.

Выбор метода исследования генетического материала (FISH, PCR, array-CGH, NGS и т.д.) и соответствующая подготовка проб зависит от показаний к ПГТ.

Биопсия бластомеров.

- Процедуру биопсии бластомеров проводят на 3 день развития эмбрионов.

Рекомендуется забирать не более одного бластомера от каждого эмбриона. Забор большего числа клеток может негативно влиять на жизнеспособность и имплантационный потенциал эмбриона (169, 170). Уровень убедительности рекомендаций A (уровень достоверности доказательств - 1b).

- Забор большего числа клеток не рекомендуется проводить для эмбрионов, имеющих в составе менее 6 клеток (169, 170). Уровень убедительности рекомендаций A (уровень достоверности доказательств - 1b).

- Биопсию компактизующихся эмбрионов рекомендуется проводить в специальной среде для биопсии, не содержащей ионы Ca2+/Mg2+ для минимизации риска лизиса окружающих клеток (171, 172). Уровень убедительности рекомендаций B (уровень достоверности доказательств - 2b).

- Для анализа рекомендуется забирать бластомер среднего размера с четко визуализируемым одним ядром (173). Уровень убедительности рекомендаций B (уровень достоверности доказательств - 2b).

Биопсия трофэктодермы.

- При подготовке к биопсии трофэктодермы рекомендуется проводить вспомогательный хетчинг любым методом на 3 или 4 день развития, однако лазерный хетчинг предпочтителен как наименее оператор-зависимая и затратная по времени процедура (174). Уровень убедительности рекомендаций A (уровень достоверности доказательств - 1b).

- Процедуру биопсии трофэктодермы рекомендуется проводить на 5 и 6 день развития на бластоцистах отличного и хорошего качества (не менее 3BB по классификации Гарднера) (175). Уровень убедительности рекомендаций C (уровень достоверности доказательств - 4).

- Эмбрионы плохого качества рекомендуется биопсировать после обсуждения с пациентами всех возможных рисков проведения подобной манипуляции и последующей криоконсервации. В особых случаях возможна биопсия остановившихся в развитии эмбрионов, диагностируемых с целью уточнения причины остановки в развитии. Уровень убедительности рекомендаций C (уровень достоверности доказательств - 4).

- Не рекомендуется при биопсии трофэктодермы забирать в биоптат клетки, не включенные в состав бластоцисты, и прочие цитоплазматические фрагменты для минимизации риска ложноположительных результатов ПГТ. Уровень убедительности рекомендаций C (уровень достоверности доказательств - 4).

- В случае применения лазерной биопсии допускается не более двух - трех выстрелов для облегчения разрыва контактов между клетками трофэктодермы. Не рекомендуется использовать лазер вблизи внутренней клеточной массы эмбриона, а также рекомендуется делать выстрелы в область межклеточных контактов с целью минимизации повреждения клеток трофэктодермы. Уровень убедительности рекомендаций C (уровень достоверности доказательств - 4).

- При невозможности интерпретации генетической лабораторией полученных данных (в т.ч. из-за отсутствия амплификации, деградации хроматина) рекомендуется повторно провести биопсию соответствующего эмбриона после обсуждения с пациентами возможных рисков проведения подобной манипуляции и последующей повторной криоконсервации (176, 177). Уровень убедительности рекомендаций C (уровень достоверности доказательств - 3).

Комментарии. Подготовку и хранение проб биоптата необходимо осуществлять согласно рекомендациям генетической лаборатории с использованием предоставленного генетической лабораторией буфера и учетом конкретного метода тестирования. Метод проведения вспомогательного хетчинга при подготовке к биопсии не оказывает влияния на достоверность результатов генетического тестирования (174, 178, 179).