II. Экспертиза ГММ

6. В рамках экспертизы ГММ осуществляется рассмотрение представленных заявителем документов и данных:

а) наименования ГММ с указанием его таксономического статуса; полного наименования, адреса в пределах места нахождения, идентификационного номера налогоплательщика заявителя; полного наименования и адреса в пределах места нахождения юридического лица, фамилии, имени, отчества (при наличии), адреса места жительства индивидуального предпринимателя - изготовителя образцов ГММ, предоставленных на экспертизу; вида предполагаемого целевого использования ГММ; регистрационного номера свидетельства о государственной регистрации ГММ, предназначенного (предназначенных) для выпуска в окружающую среду, на основе которого (которых) создан ГММ, в отношении которого проводится экспертиза (в случае если ГММ создан на основе иного (иных) ГММ); регистрационного номера свидетельства о государственной регистрации ГММ для иного целевого использования (при наличии) либо информации об отсутствии такого свидетельства;

б) сведений об исходном микроорганизме-реципиенте (таксономическая характеристика с указанием метода идентификации; источник выделения штамма: субстрат, географический пункт, дата выделения; методы идентификации штамма, кем идентифицирован (фамилия, имя, отчество (при наличии), ссылка на использованные определители);

в) описания структуры генетической конструкции (внесенной или удаленной) и места ее локализации, характеристики экспрессии встроенных или измененных генов;

г) сведений о трансформационном событии в виде кода, сформированного согласно Общероссийскому классификатору трансформационных событий;

д) информации о генетической модификации (описание метода модификации, структуры вектора, структуры вставки);

е) информации о месте депонирования и коллекционном номере штамма ГММ, паспорта штамма ГММ (для депонированных штаммов ГММ) либо следующей информации (в случае непредставления информации о месте депонирования и коллекционном номере штамма ГММ, паспорта штамма ГММ):

о культурально-морфологических, физиолого-биохимических (ферментативных), антигенных, биологических свойствах и генетических особенностях штамма ГММ;

об условиях культивирования: наименованиях питательных сред, pH среды, температуре и продолжительности выращивания, сроке хранения и периодичности пересева культуры штамма ГММ в нативной форме;

о применяемом способе и условиях хранения штамма ГММ: в случае лиофилизации указываются продолжительность выращивания на питательной среде (возраст культуры), состав защитной среды, титр клеточной суспензии, режим высушивания, температура хранения, срок хранения; в случае криоконсервации указываются продолжительность выращивания на питательной среде (возраст культуры), состав защитной среды, титр клеточной суспензии, скорость замораживания (град/мин), температура хранения, срок хранения;

о диссоциации культуры в зависимости от метода хранения (описание морфологических типов колоний на конкретной среде с подробным описанием типа, сохраняющего полезный или диагностический признак);

о среде, на которой заявителем предоставляется штамм ГММ;

о количестве, дате приготовления и сроке годности образцов штамма ГММ;

ж) информации о вносимых генах (для организмов-доноров указывается таксономический статус, данные о вирулентных, аллергенных и патогенных свойствах);

з) описания свойств, приобретенных ГММ в результате модификации;

и) характеристики различий ГММ с исходным микроорганизмом-реципиентом, в том числе описания способа размножения, распространения, вирулентности, схемы культивирования, новых фенотипических свойств, биологических преимуществ ГММ по сравнению с исходным микроорганизмом-реципиентом;

к) описания методики, позволяющей подтвердить таксономический статус ГММ, описания нуклеотидных последовательностей, используемых праймеров, зондов, условий проведения полимеразной цепной реакции;

л) результатов изучения стабильности ГММ, в том числе в организмах животных (крыс или мышей), а также оценки способности к переносу генов, введенных в исходный микроорганизм-реципиент с использованием методов генной инженерии в другие микроорганизмы;

м) информации о регистрации ГММ в государствах - членах Евразийского экономического союза, иных государствах или об отсутствии такой регистрации, а также о наличии либо отсутствии фактов негативных последствий применения ГММ;

н) копии заключения о результатах молекулярно-генетического исследования ГММ;

о) информации о биоинформатическом анализе, поиске гомологии рекомбинантного белка с аминокислотными последовательностями токсических белков, белков, обладающих фармакологической или иной биологической активностью, при использовании специализированных баз данных;

п) протоколов исследований, указанных в пункте 7 настоящей Методики, проведенных в организациях (испытательных лабораториях), аккредитованных в национальной системе аккредитации в области аккредитации, соответствующей исследованиям, указанным в настоящей Методике (при наличии).

7. В отношении ГММ должны быть проведены следующие исследования в сравнении с исходным микроорганизмом-реципиентом:

а) исследование вирулентности ГММ на лабораторных животных;

б) токсикологические исследования на лабораторных животных;

в) исследования стабильности свойств ГММ;

г) исследование жизнестойкости ГММ на объектах окружающей среды, в том числе на влажных опилках, ватных тампонах, при термической обработке.

8. В случае отсутствия у заявителя протоколов исследований, указанных в подпункте "п" пункта 6 настоящей Методики, им должны быть представлены образцы ГММ и исходного микроорганизма-реципиента. Соответствующие исследования этих образцов проводятся организацией (испытательной лабораторией), осуществляющей проведение экспертизы.

9. Если ГММ соответствует показателям (условиям) безопасности, указанным в пункте 10 настоящей Методики, заявителю должно быть выдано заключение об отсутствии негативного воздействия ГММ на окружающую среду. В заключении об отсутствии негативного воздействия на окружающую среду могут быть указаны специальные условия использования ГММ.

10. Требования к проведению исследований и показатели (условия) безопасности ГММ:

а) исследования вирулентности ГММ на лабораторных животных должны проводиться на свободных от специфических патогенов мышах или цыплятах с определением летальной дозы для 50% лабораторных животных (далее - ЛД50) в течение 10 календарных дней при соотношении самцов и самок 1:1. Животные должны быть разделены на 2 равные группы: группа "контроль" и группа "опыт". Определение ЛД50 проводится путем внутрибрюшинного введения животным группы "опыт" по 0,1 см³ живой суточной культуры исследуемого штамма в концентрации 1x10(9), 1x10(7), 1x10(5) и 1x10(3) КОЕ/см³. Животным группы "контроль" внутрибрюшинно вводится стерильный физиологический раствор или стерильная среда для культивирования исследуемого штамма ГММ.

Обе группы животных должны получать одинаковый по объему и составу рацион. Животные должны иметь доступ к корму и воде, содержаться в помещении с системой отопления и регулируемым микроклиматом.

По завершении эксперимента необходимо подсчитать гибель животных в каждой группе и определить ЛД50. Если ЛД50 равна 5x10(8) КОЕ/см³ и более, штамм считают авирулентным. ЛД50 для штамма ГММ не должна быть меньше ЛД50 исходного микроорганизма-реципиента;

б) токсикологические исследования на лабораторных животных должны проводиться на крысах или мышах (в зависимости от вида животных, сведения о которых представлены заявителем в соответствии с пунктом 6 настоящей Методики) в течение 90 календарных дней при соотношении самцов и самок 1:1. Животные должны быть разделены на 2 равные группы: группа "контроль" и группа "опыт". Группа "контроль" должна получать рацион с включением исходного микроорганизма-реципиента; группа "опыт" должна получать рацион с включением исследуемого ГММ. Обе группы животных должны получать одинаковый по объему и составу рацион, за исключением включенного исследуемого ГММ или исходного микроорганизма-реципиента. Исследуемый ГММ и исходный микроорганизм-реципиент должны быть включены в состав корма в равном количестве. Животные должны иметь доступ к корму и воде, содержаться в помещении с системой отопления и регулируемым микроклиматом.

Должны исследоваться следующие показатели состояния животных:

персистенция и выделение ГММ из организма животных;

общее состояние животных: внешний вид, двигательная активность, состояние шерстного покрова - каждые 2 календарных дня; поедаемость корма - ежедневно; масса тела - каждые 7 календарных дней;

гематологические показатели крови: концентрация гемоглобина; гематокрит; общее количество эритроцитов; средний объем эритроцита (СОЭ); среднее содержание гемоглобина в эритроците (ССЭ); средняя концентрация гемоглобина в эритроците (СКЭ); общее количество тромбоцитов; общее количество лейкоцитов; дифференцированный подсчет лейкоцитов (нейтрофилы, лимфоциты, эозинофилы, моноциты, базофилы);

биохимические показатели крови: аланинаминотрансфераза (АЛТ); аспартатаминотрансфераза (АСТ); желчные кислоты; фосфатаза щелочная; билирубин общий; билирубин прямой; белок общий; альбумин; глобулин; креатинин; глюкоза; альфа-амилаза; липаза; лактатдегидрогеназа; общие липиды; триглицериды; холестерин; холинэстераза; мочевина; хлориды; натрий; фосфор; калий;

общий анализ мочи: цвет и прозрачность; относительная плотность; pH; белок; глюкоза; креатинин.

Исследования гематологических и биохимических показателей крови, персистенции и показателей мочи должны проводиться на 90-й календарный день опыта у 50% животных из каждой группы. По окончании восстановительного периода (10-й календарный день со дня окончания дачи рациона с ГММ, 101-й календарный день опыта) должны проводиться те же исследования у второй половины животных каждой группы.

Скармливание животным рациона, содержащего ГММ, не должно вызывать клинических изменений (показатели крови, мочи, общего состояния животных группы "опыт", персистенции и выделения ГММ не должны отклоняться от показателей группы "контроль"), не должны выявляться патологоанатомические изменения при вскрытии;

в) стабильность свойств ГММ должна проверяться при пассировании исследуемых штаммов на жидких и плотных питательных средах с тестированием фенотипических (биохимических) свойств через 6 последовательных пассажей. Молекулярно-генетическими методами должен исследоваться исходный ГММ и ГММ после шестикратного пассирования. Стабильными являются штаммы ГММ, не изменившие фенотипических (биохимических) свойств и сохранившие генетическую структуру после проведения шестикратного пассирования. ГММ должны демонстрировать стабильность фенотипических (биохимических) свойств и генетической структуры;

г) исследование жизнестойкости ГММ на объектах окружающей среды, в том числе на влажных опилках, ватных тампонах, при термической обработке должно проводиться с использованием питательных сред, культур клеток или иных тест-объектов, чувствительных к исходному микроорганизму-реципиенту, согласно информации, представленной заявителем в соответствии с пунктом 6 настоящей Методики. Эксперименты должны проводиться с использованием в качестве контроля исходного микроорганизма-реципиента. Условия экспериментов для исходного микроорганизма-реципиента и ГММ должны совпадать. Жизнестойкость ГММ в окружающей среде не должна превышать жизнестойкость исходного микроорганизма-реципиента.