Проведение анализа

3.84. Вставляют в рамку планшета стрипы с адсорбированными антителами в количестве, соответствующем числу проб, подготовленных для анализа. Добавляют по 100 мкл исследуемого раствора в лунки соответствующего стрипа, в лунки добавляют по 100 мкл положительного контроля (стандарта, который заранее аккуратно встривают или пипетируют 3 раза пипеткой), 100 мкл фосфатно-солевой буфер (англ. Phosphate buffered saline, PBS в контрольную лунку; добавляют по 10 мкл в образцы (добавляют в случае работы с супернатантами из бактериальных клеток, биологическими жидкостями, гомогенатами тканей; не добавляют в случае работы с сывороткой или плазмой) балансового раствора, хорошо перемешивают; добавляют по 50 мкл конъюгата в каждую лунку (за исключением отрицательного контроля), хорошо перемешивают, накрывают и оставляют на инкубацию в течение одного часа при температуре плюс 37 °C. Далее проводят трехкратную отмывку лунок готовым моющим буфером, каждый раз используют объем буфера по 250 мкл, лунки планшета высушивают.

3.85. После инкубации повторяют процедуру промывки лунок моющим буфером еще три раза.

3.86. Добавляют по 50 мкл субстрата и хромогена в каждую лунку. Осторожно перемешивают вручную и инкубируют при температуре плюс 37 °C в течение 15 - 20 минут (не более 30 минут) в темноте.

3.87. Добавляют в каждую лунку по 50 мкл стоп-реагента и осторожно перемешивают вручную. В течение 30 минут после добавления стоп-реагента измеряют оптическую плотность в каждой лунке при 450 нм ("бланк" или нулевое считывание по воздуху).