Выявление продукта амплификации классической ПЦР

7.14. Проводится в зоне 3 - помещении для детекции продуктов амплификации. Продукт ПЦР - это фрагмент ДНК, имеющий определенный размер, одним из наиболее доступных способов его обнаружения является электрофоретическое разделение реакционной смеси в агарозном геле.

7.15. Для проведения электрофореза используют комплекты реагентов для качественной электрофоретической детекции продуктов амплификации в агарозном геле. Электрофорез проводят в соответствии с инструкцией по применению соответствующего набора реактивов.

7.16. Для снижения риска контаминации тестируемых образцов продуктами амплификации предыдущих ПЦР-исследований непосредственно перед проведением электрофореза в каждую ПЦР-пробу под воск вносят по 5 мкл препарата урацил-ДНК-гликозидазы (УДГ) отдельным наконечником и перемешивают пипетированием. Инкубируют при комнатной температуре (не ниже 20 °C) в течение 10 минут, после чего вносят по 5 мкл пробы в лунки 1,5%-го агарозного геля и проводят электрофорез.

7.17. Регистрацию результатов электрофореза проводят с помощью ультрафиолетового трансиллюминатора. В УФ-свете видны оранжевые полосы, соответствующие фрагментам ДНК.

7.18. Изображение геля фиксируют в памяти персонального компьютера с помощью цифровых систем для обработки видеоинформации.