Методика оценки подвижности сперматозоидов

Хорошо перемешать образец спермы. Взять аликвоту эякулята и поместить на предметное стекло, накрыть покровным стеклом. При увеличении 200x или 400x подсчитать 200 сперматозоидов для вычисления доли (%) сперматозоидов различных категорий подвижности. Подвижность каждого сперматозоида оценивается следующим образом: прогрессивно-подвижные (PR, progressive motility) - сперматозоиды, двигающиеся активно, либо линейно, либо по кругу большого радиуса, независимо от скорости; непрогрессивно-подвижные (NP, non-progressive motility) - все другие виды движений с отсутствием прогрессии, то есть плавающие по кругу небольшого радиуса, жгутик с трудом смещает головку или когда наблюдают только биение жгутика; неподвижные (IM, immotility) - отсутствие движения. Повторно взять аликвоту эякулята (предварительно перемешав) и повторить процедуру. Вычислить средние значения и различия между ними для двух аликвот. Определить приемлемость различия (WHO, 2010). Если различие между процентными значениями приемлемо, записать среднее значение. Если различие выше допустимого, приготовить две дополнительные аликвоты спермы и повторить оценку.

Следует отметить, что выявление тотальной и субтотальной астенозооспермии (астенотератозооспермии) и олигоастенотератозооспермии не является обязательным (облигатным) сперматологическим признаком ПЦД, так как они могут быть обусловлены другими причинами. Пациентам с тотальной и субтотальной астенозооспермией (астенотератозооспермией) следует проводить ЭМИС. Для пациентов с ПЦД не характерно наличие тяжелых форм патозоспермии, связанных с отстутствием или крайне низкой концентрацией сперматозооидов (азооспермией и олигозооспермией тяжелой степени). Азооспермия, олигоспермия (объем эякулята менее 1,5 мл), а также кислая реакция эякулята (pH < 7.0), сниженное количество фруктозы эякулята (маркер секрета семенных пузырьков) характерны для мужчин с муковисцидозом и синдромом врожденной двусторонней алазии семявыносящих протоков (CBAVD), но не пациентов с ПЦД/синдромом Картагенера или с обратным расположением внутренних органов. Спермиологическое исследование может быть использовано для дифференциальной диагностики различных заболеваний с поражением органов дыхательной системы, например, у мужчин с брохоэктазами [86, 87]. Нормативные значения показателей эякулята представлены в Приложении А3.6, классификация спермиологических "диагнозов" - в Приложении А3.7.

- Рекомендовано рассмотреть возможность проведения ЭМИС в качестве дополнительного метода подтверждения диагноза ПЦД и при сомнительных результатах проведенного обследования (световая микроскопия, высокоскоростной видеомикроскопический анализ (Микроскопическое исследование спермы, Спермограмма)) с целью выявления ультраструктурных изменений аксонемы жгутиков [74, 75, 76, 84, 85, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102].

(УУР - B, УДД - 4)

Комментарий:

Метод ЭМИС доступен только в некоторых крупных научно-исследовательских лабораториях/институтах.

Проведение электронной микроскопии сперматозоидов (электронной микроскопии эякулята) возможно только у взрослых мужчин и мальчиков подростков с 15 лет.

Поражение ресничек мерцательного эпителия и жгутиков сперматозоидов у пациентов с ПЦД могут не совпадать, т.е. иметь разную локализацию поражений, как одинаковую в разных клетках, так и различающуюся, например, только нарушение ультраструктуры и подвижности жгутиков сперматозоидов.

Следует учитывать гетерогенность морфологии сперматозоидов. В связи с этим существенное значение имеет электронно-микроскопическое исследование достаточного количества жгутиков в каждом конкретном образце. Для исследования необходимо не менее 50 жгутиков сперматозоидов.

При ультраструктурных исследованиях жгутиков важным моментом является гомогенность (однотипность) выявленных нарушений в конкретном изучаемом образце. Однотипные нарушения должны быть выявлены либо тотально во всех изученных ресничках или жгутиках, либо в подавляющем большинстве.

Европейская комиссия по ПЦД при сравнении точности высокоскоростной видеомикроскопии (HSVM) (патолого-анатомическое исследование биопсийного (операционного) материала тканей верхних дыхательных путей/патолого-анатомическое исследование биопсийного (операционного) материала тканей трахеи и бронхов)), иммунофлуоресценции (IF) (Иммуноцитохимическое исследование биологического материала) и исследования уровня оксида азота (NO) в выдыхаемом назальном воздухе (Определение уровня оксида азота в выдыхаемом воздухе) с эталонным тестом трансмиссионной электронной микроскопии (ТЭМ) и/или молекулярно-генетического исследования, дает убедительные рекомендации по использованию HSVM, IF и nNO в качестве дополнительных тестов к ТЭМ и/или молекулярно-генетических методов для диагностики ПЦД. Однако ни один дополнительный тест не подходит в качестве отдельного теста для диагностики ПЦД и ни один дополнительный или эталонный тест не подходит для исключения ПЦД.

Установление генетического диагноза поощряется из-за его влияния на ведение пациента. Комиссия подчеркивает, что тесты должны соответствовать минимальным стандартам, и предлагает обследовать пациентов в специализированных центрах, имеющих опыт диагностики ПЦД. При интерпретации результатов следует учитывать вероятность предварительного тестирования, основанную на симптомах. У лиц с клиническими особенностями ПЦД, у которых не обнаружено патогенных вариантов генов, для подтверждения диагноза ПЦД можно использовать ТЭМ [274].