3.6. Метод иммуноблоттинга и ИФА (технология Protia Allergy-Q)

3.6.1. Технология Protia Allergy-Q сочетает в себе метод ИФА и иммуноблоттинг (иммуноблот) - выявления антител к отдельным антигенам, основанная на постановке ИФА на нитроцеллюлозных мембранах.

3.6.2. Биоматериал: сыворотка венозной крови.

3.6.3. Список исследуемых аллергенов представлен в приложении 4 к настоящим МР.

3.6.4. Оборудование и материалы, необходимые при работе.

3.6.4.1. Для ручной постановки:

1) оборудование <35>:

--------------------------------

<35> Примечание: допускается использование оборудования с аналогичными или лучшими техническими характеристиками.

- орбитальное качающее устройство или качающее устройство (например, КУ-400);

- анализатор иммунологический фотометрический "Q-SMART" для диагностики in vitro на панелях PROTIA Allergy-Q, позволяющий производить измерение оптической плотности в лунках планшета при длине волны 450 нм (основная) и 620 нм (референсная);

- аспиратор вакуумный;

- пипетки автоматические одноканальные со сменными наконечниками, позволяющие отбирать объемы жидкостей от 0,01 мл до 5,0 мл, аттестованные по значению средней дозы и сходимости результатов пипетирования (погрешность не более 3%);

- цилиндры мерные вместимостью 10 мл и 200 мл, ГОСТ 1770-74;

- стаканы мерные вместимостью 10 мл и 200 мл.

2) расходные материалы <36>:

--------------------------------

<36> Примечание: допускается использование расходных материалов с аналогичными или лучшими характеристиками.

- пинцет пластмассовый;

- перчатки резиновые;

- вода дистиллированная, ГОСТ 58144-2018;

- контейнер для сбора твердых отходов;

- контейнер для слива отработанных жидкостей;

- флаконы стеклянные вместимостью 20 мл;

- бумага фильтровальная, ГОСТ 12026-76;

- одноразовая посуда для приготовления рабочих растворов конъюгата и хромогена.

3) Набор реагентов Protia Allergy-Q <37>.

--------------------------------

<37> Примечание: допускается использование других реагентов с аналогичными характеристиками.

Состав набора Protia Allergy-Q:

- панель для аллергенов;

- разбавитель образца;

- раствор антител;

- ферментный раствор;

- раствор субстрата;

- моющий раствор;

- инструкция по применению.

3.6.4.2. Для автоматической постановки:

1) оборудование <38>:

--------------------------------

<38> Примечание: допускается использование оборудования с аналогичными или лучшими техническими характеристиками.

- прибор для автоматизации иммуноблота;

- анализатор автоматический иммунологический фотометрический "Q-Station Elite" для диагностики in vitro на панелях "Protia", позволяющий производить измерение оптической плотности в лунках планшета при длине волны 450 нм (основная) и 620 нм (референсная);

- аспиратор вакуумный;

- холодильник бытовой;

- дозаторы полуавтоматические одноканальные с переменным или фиксированным объемом со сменными наконечниками, позволяющие отбирать объемы жидкости от 5 до 1000 мкл;

- цилиндр мерный вместимостью 1000 мл, ГОСТ 1770-74.

2) расходные материалы <39>:

--------------------------------

<39> Примечание: допускается использование расходных материалов с аналогичными или лучшими характеристиками.

- перчатки резиновые;

- вода дистиллированная, ГОСТ 58144-2018;

- дезинфицирующие средства.

3) Набор реагентов Protia Allergy-Q <40>.

--------------------------------

<40> Примечание: допускается использование других реагентов с аналогичными характеристиками.

Состав набора Protia Allergy-Q см. в п. 3.6.4.1.

3.6.5. Методика:

- метод ИФА, включающий в себя одну нитроцеллюлозную мембрану;

- подготовка нитроцеллюлозной мембраны с аллергенами;

- внесение сыворотки больного (специфические АТ связываются с соответствующими АГ);

- добавление АТ против иммуноглобулинов человека, меченных ферментом;

- добавление субстрата и учет реакции.

3.6.6. Интерпретация результатов определения уровня содержания специфических IgE (табл. 3.5) проводится с учетом методики, в соответствии с инструкциями производителей наборов реагентов/тест-систем и оборудования (список исследуемых аллергенов представлен в приложениях 4, 5 к настоящим МР).

Таблица 3.5

Интерпретация результатов содержания IgE в сыворотке крови