IV. Методы оценки чувствительности к дезинфицирующим средствам микроорганизмов, циркулирующих в медицинских организациях

4.1. При оценке чувствительности к ДС микроорганизмов, циркулирующих в медицинских организациях, применяются средства измерений, вспомогательное оборудование, материалы, реактивы и питательные среды, приведенные в таблицах 1 - 3.

Таблица 1

Средства измерений

Таблица 2

Вспомогательное оборудование и материалы

Таблица 3

Реактивы и питательные среды

4.2. Подготовка культуры микроорганизма.

Микроорганизмы культивируют на следующих питательных средах:

- бактерии - на казеиновом бульоне, мясо-пептонном бульоне, казеиновом агаре, мясо-пептонном агаре или других питательных средах, предназначенных для культивирования определенных видов бактерий при температуре плюс (37 1) °C в течение 18 - 24 ч;

- M. tuberculosis, нетуберкулезные микобактерии, выделенные от больных и из объектов непосредственно в данном учреждении - на среде Левенштейна-Йенсена, Финна 2 или аналогичной среде при температуре плюс (37 1) °C в течение 7 - 28 суток;

- грибы рода Candida - на бульоне Сабуро, агаре Сабуро или аналогичных питательных средах при температуре плюс (27 1) °C в течение 2 суток.

4.3. Приготовление микробной взвеси.

Для приготовления микробной взвеси культуру смывают с агара стерильной водопроводной водой или стерильным физиологическим раствором. Полученную взвесь фильтруют через стерильный ватно-марлевый фильтр и разводят стерильной водопроводной водой или стерильным физиологическим раствором до концентрации 2 x 10⁹ клеток в 1 см³, соответствующей по мутности 20 единицам мутности отраслевого стандартного образца ОСО 42-28-84 - 11 (20 ME) или 6,5 - 6,7 единицам по стандарту Мак-Фарланда, определяемым с помощью денситометра. Для контаминации медицинских изделий готовят суспензию 1 x 10⁹ клеток в 1 см³, соответствующей по мутности 10 единицам мутности отраслевого стандартного образца ОСО 42-28-84 - 11 (10 ME) или 3,3 - 3,5 единицам по стандарту Мак-Фарланда.

4.4. Приготовление рабочих растворов ДС.

Рабочий раствор ДС готовят с соблюдением мер предосторожности в соответствии с рекомендациями, изложенными в Инструкции.

Если ДС представляет опасность при ингаляционном воздействии, растворы готовят в вытяжном шкафу или в отдельном помещении, оборудованном приточно-вытяжной вентиляцией, с защитой органов дыхания респираторами, кожи рук - влагонепроницаемыми перчатками, глаз - защитными очками.

4.5. Приготовление нейтрализатора.

Для нейтрализации действующего вещества (далее - ДВ), которое может быть перенесено с материалом тест-объекта при его посеве в питательную среду, используют нейтрализатор - вещество, которое устраняет (нейтрализует) действие химического агента на микробную клетку, но не убивает и не задерживает рост тест-микроорганизма. В качестве нейтрализаторов для ДВ из различных химических групп применяют <9>:

--------------------------------

<9> Пункт 3.1.6 Р 4.2.3676-20 "Методы лабораторных исследований и испытаний дезинфекционных средств для оценки их эффективности и безопасности", утвержденного руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителем и благополучия человека, Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации 18.12.2020.

- для галоидактивных (хлор-, бром- и йодактивные) и кислородактивных (перекись водорода, ее комплексы с солями, надуксусная кислота, озон) - 0,1 - 1,0% растворы тиосульфата натрия;

- для четвертичных аммониевых солей (например, алкилдиметилбензиламмоний хлорид, дидецилдиметиламмоний хлорид), аминов, производных гуанидина (например, полигексаметиленгуанидин гидрохлорид, хлоргексидин биглюконат) - универсальный нейтрализатор, содержащий Твин 80 (3%), сапонин (0,3 - 3,0%), гистидин (0,1%), цистеин (0,1%);

- для альдегидов (глутаровый альдегид, глиоксаль, формальдегид, ортофталевый альдегид) - 1,0% раствор пиросульфита (метабисульфита) натрия или универсальный нейтрализатор (см. выше);

- для кислот - щелочи в эквивалентном количестве;

- для щелочей - кислоты в эквивалентном количестве;

- для спиртов - вода;

- для композиционных средств - универсальный нейтрализатор (см. выше). Если в состав средства входят окислители, в нейтрализатор дополнительно вводят тиосульфат натрия (0,1 - 1,0%).

Как альтернатива универсальному нейтрализатору может быть использован нейтрализующий питательный бульон или агар по Ди-Ингли.

Приготовление и стерилизацию указанных питательных сред осуществляют в соответствии с Инструкцией.

4.6. Выбор тест-объекта, используемого для оценки чувствительности выделенного штамма микроорганизма.

Выбор тест-объекта зависит от назначения ДС. При определении чувствительности выделенного штамма микроорганизма к ДС, предназначенному для обеззараживания поверхностей в помещениях, в качестве тест-объекта используют различные материалы, например, линолеум, кафельную плитку, пластик, стекло, фаянс (не менее 3 видов).

При определении чувствительности выделенного штамма микроорганизма к ДС, предназначенному для обеззараживания медицинских изделий, в качестве тест-объектов используют материалы, из которых изготовлены изделия (стекло, металлы, пластмассы, резины).

При определении чувствительности выделенного штамма микроорганизма к ДС универсального назначения выбирают для оценки чувствительности режимы обеззараживания объектов разными способами: способом протирания (например, поверхности) и погружения (например, медицинские изделия).

При использовании для оценки чувствительности упрощенного метода в качестве тест-объекта используют чашку Петри из стекла или пластика. При выборе методов "в" и "г" исследования проводят на полистироловых планшетах.

4.7. Оценка чувствительности выделенного штамма микроорганизма к ДС, предназначенным для обеззараживания поверхностей.

При проведении исследований используют тест-объекты размером 5 x 5 см из различных материалов, но не менее 3 видов.

В качестве тест-микроорганизма используют микроорганизм, выделенный от больного или с поверхности объекта внутрибольничной среды. Эксперимент проводят после идентификации микроорганизма и проверки чистоты культуры.

Тест-объекты перед контаминацией микроорганизмом подвергают механической очистке - моют водой с мылом и щеткой, затем высушивают при комнатной температуре и автоклавируют. При использовании тест-объектов, не устойчивых к автоклавированию, допускается их обработка фламбированием с помощью смоченного в спирте горящего ватного тампона.

Тест-объект помещают на дно стерильной чашки Петри и располагают на лабораторном столе в микробиологическом боксе или боксах микробиологической безопасности II класса на поддонах с салфетками, смоченными дезинфицирующим раствором. Пипеткой наносят на них 0,1 см³ микробной взвеси с концентрацией 2 x 10⁹ клеток в 1 см³ (площадь поверхности 25 см²), равномерно распределяют ее по поверхности стерильным шпателем, не допуская стекания суспензии за пределы тест-объекта, затем подсушивают, приоткрыв чашку Петри (до полного высыхания) при температуре плюс 18 - 22 °C и относительной влажности 40 - 60%, после чего обрабатывают раствором ДС.

Обработку тест-объектов раствором ДС проводят способами протирания или орошения (в зависимости от рекомендаций, изложенных в Инструкции).

При обработке способом протирания перед нанесением ДС на контаминированный тест-объект помещают стерильную марлевую салфетку размером 5 x 5 см для предотвращения стекания ДС, затем наносят ДС с помощью пипетки и протирают тест-объект этой салфеткой. При обработке способом орошения дезинфицирующий раствор наносят с помощью распылителя с дозатором. Количество наносимого дезинфицирующего раствора зависит от рекомендуемой нормы расхода, указанной в инструкции по применению средства: например, если норма расхода составляет 100 мл/м², то на объект размером 5 x 5 см наносят 0,25 см³ средства.

После окончания экспозиции чашки с тест-объектами заливают 10 см³ раствора нейтрализатора, соответствующего данному ДС, и делают несколько круговых движений чашкой для лучшего смачивания тест-объекта. Через несколько минут стерильным пинцетом переворачивают тест-объект и повторяют круговые движения. После контакта нейтрализатора с тест-объектом в течение 10 мин снова делают несколько круговых движений чашкой, затем стерильным пинцетом удаляют тест-объект из чашки и сбрасывают его в емкость с дезинфицирующим раствором с целью дальнейшего обеззараживания.

Нейтрализатор из чашки Петри засевают (на 2 - 3 чашки по 0,1 - 0,2 см³ в каждую) на твердые дифференциально-диагностические питательные среды либо заливают чашку с нейтрализатором растопленным и остуженным до температуры плюс 45 °C агаром. После застывания агара посевы помещают в термостат и культивируют при оптимальной температуре, необходимой для роста данного микроорганизма: для бактерий - при плюс (37 1) °C до 48 ч; для микобактерий - при плюс (37 1) °C в течение 21 суток; для грибов рода Candida - при плюс (27 1) °C до 10 суток. Более длительные сроки культивирования микроорганизмов после воздействия растворов ДС рекомендуются для лучшего восстановления их жизнеспособности и снятия бактериостатического действия.

Контрольные тест-объекты обрабатывают так же, как и опытные, используя вместо ДС стерильную водопроводную воду.

Учет результатов проводят путем оценки остаточной обсемененности поверхностей после обработки раствором ДС в выбранном режиме. После подсчета количества выросших на чашках Петри колоний рассчитывают плотность контаминации 25 см² поверхности и эффективность обеззараживания, принимая количество колоний, снятых с контрольных поверхностей, за 100%. Эффективность обеззараживания рассчитывают по формуле (1):

, (1)

где: X - эффективность обеззараживания;

О_п - количество микробных клеток на опытной поверхности;

К - количество микробных клеток на контрольной поверхности.

Пример расчета. С 25 см² контрольной поверхности снято 148000 микробных клеток, а с аналогичного вида опытной поверхности - 20 микробных клеток. Эффективность обеззараживания при этом: 100 - (20 / 148000 x 100) = 99,986%.

Если гибель микроорганизма на обработанных поверхностях составляет 99,99% и более, выделенный госпитальный штамм считают чувствительным к действию ДС, если менее 99,99% - считают устойчивым к данному ДС в исследуемом режиме применения.

Исходя из полученных результатов, выдают рекомендации по дальнейшему использованию ДС для дезинфекции в МО:

- при установлении чувствительности госпитального штамма микроорганизма к действию ДС в каком-либо из рекомендованных в инструкции по применению средства режимов, средство в данном режиме (режимах) можно применять для обеззараживания поверхностей;

- в том случае, когда установлена устойчивость госпитального штамма микроорганизма к действию ДС в испытанном режиме применения, данное ДС рекомендуется заменить на другое, эффективное в отношении данного штамма.

4.8. Оценка чувствительности выделенного штамма микроорганизма к ДС, предназначенным для обеззараживания медицинских изделий.

В качестве тест-изделий используют стерильные медицинские изделия из различных материалов (металл, резина, пластмасса, стекло). Перечень медицинских изделий из металлов, взятых в эксперимент, включает инструменты, имеющие (например, корнцанг) и не имеющие замковых частей (например, пинцеты, шпатели).

В качестве тест-микроорганизма используют выделенный от больного или из объектов внутрибольничной среды штамм микроорганизма.

Изделия размещают в лотке (на поддоне) на лабораторном столе микробиологического бокса или бокса микробиологической безопасности II класса.

На поверхность тест-изделия (у замковых медицинских изделий - в область замка, а при наличии каналов и полостей - также в канал изделия) с помощью пипетки наносят по 0,1 см³ суспензии тест-микроорганизмов с концентрацией 1 x 10⁹ клеток в 1 см³, содержащей 40% инактивированной лошадиной сыворотки, для имитации органического загрязнения. Тест-изделия подсушивают до полного высыхания при температуре плюс 18 - 22 °C и относительной влажности 40 - 60%. Мелкие тест-изделия погружают в указанную взвесь тест-микроорганизма на 15 мин, затем их извлекают и подсушивают при тех же условиях (до полного высыхания). При испытании ДС, обладающих фиксирующими свойствами, количество добавляемой сыворотки составляет не 40, а 5%, так как в Инструкциях к таким средствам в практических условиях рекомендуется перед дезинфекцией предварительно отмывать изделия от органических загрязнений.

Дезинфицирующие растворы готовят на стерильной водопроводной воде. После подсушивания контаминированные изделия полностью погружают в раствор испытываемого ДС, заполняя им все каналы и полости изделий, избегая образования воздушных пробок. Инструменты, имеющие замковые части, погружают раскрытыми, предварительно сделав ими в растворе ДС несколько рабочих движений для лучшего проникновения раствора в труднодоступные участки изделий в области замка. Толщина слоя раствора ДС над изделиями должна быть не менее 1 см. Параллельно для контроля изделия погружают в стерильную водопроводную воду.

После окончания дезинфекционной выдержки изделия извлекают из дезинфицирующего раствора и марлевой салфеткой размером 5 x 5 см, пропитанной нейтрализатором, с поверхности изделия делают смывы, затем салфетку помещают в пробирку с 10 см³ того же нейтрализатора и встряхивают с бусами в течение 5 - 10 мин. Канал изделия промывают раствором нейтрализатора. Для оценки эффективности обеззараживания смывную жидкость с поверхности изделия и из канала засевают на соответствующие питательные среды. Мелкие изделия погружают в раствор нейтрализатора на 5 мин, а затем изделия переносят в пробирки с жидкой питательной средой.

Посевы выдерживают в термостате при температуре, оптимальной для роста тестируемого микроорганизма: для бактерий - при плюс (37 1) °C до 48 ч; для микобактерий - при плюс (37 1) °C в течение 21 суток; для грибов рода Candida - при плюс (27 1) °C до 10 суток. Более длительные сроки культивирования микроорганизмов после воздействия растворов ДС рекомендуются для лучшего восстановления их жизнеспособности и снятия бактериостатического действия.

Учет результатов проводят после инкубации посевов в термостате, отмечая наличие или отсутствие роста микроорганизма на питательных средах.

Если гибель тестируемого микроорганизма на изделиях составляет 100% (отсутствие роста во всех пробах), выделенный госпитальный штамм микроорганизма считают чувствительным к действию ДС, если менее 100% (наличие роста в одной или более пробах) - считают устойчивым к данному ДС в исследуемом режиме применения.

Исходя из полученных результатов даются рекомендации по дальнейшему использованию ДС для дезинфекции в МО:

- при установлении чувствительности госпитального штамма микроорганизма к действию ДС в каком-либо из рекомендованных в Инструкции режимов, средство в данном режиме (режимах) можно применять для обеззараживания медицинских изделий;

- в том случае, когда установлена устойчивость госпитального штамма микроорганизма к действию исследованного режима применения ДС, средство рекомендуется заменить на другое, эффективное в отношении данного штамма.

4.9. Упрощенный метод оценки чувствительности микроорганизмов к дезинфицирующим средствам.

В качестве тест-объекта вместо стеклянных или пластиковых поверхностей используют чашки Петри, изготовленные либо из стекла, либо из пластика. Если средство предназначено для дезинфекции поверхностей или посуды, то на внутреннюю поверхность чашки Петри площадью, например, 80 см² дозатором (пипеткой) наносят 0,4 см³ суспензии микроорганизма с концентрацией 2 x 10⁹ клеток в 1 см³ и равномерно распределяют ее по поверхности стерильным шпателем. Если ДС предназначено для дезинфекции медицинских изделий или предметов ухода за больными, то на поверхность чашки наносят 0,1 см³ суспензии микроорганизмов с концентрацией 1 x 10⁹ клеток в 1 см³ с добавлением 40% инактивированной лошадиной сыворотки. После подсушивания обработку зараженной поверхности чашки проводят по режиму и способу, рекомендованному в Инструкции (орошение, протирание или погружение), соблюдая режим и рекомендованные нормы расхода соответственно выбранному способу обработки. После окончания дезинфекционной выдержки чашку заливают 8 см³ раствора нейтрализатора, соответствующего данному ДС, и делают несколько круговых движений чашкой для лучшего смачивания ее поверхности. Через определенную временную выдержку, необходимую для действия нейтрализатора, например, 10 мин, жидкость заливают растопленным и остуженным до 45 °C агаром. Посевы выдерживают в термостате при температуре и времени, оптимальных для роста тестируемого микроорганизма, после чего проводят учет результатов.

Анализ результатов проводят путем сравнения количества колониеобразующих единиц (КОЕ), выросших на опытной чашке, в сравнении с контрольной, контаминированной аналогично опытной и обработанной стерильной водопроводной водой. Критерий эффективности - снижение микробной обсемененности не менее чем на 99,99% (при оценке эффективности обеззараживания поверхностей) и не менее 100% (при оценке эффективности обеззараживания медицинских изделий, посуды, предметов ухода за больными).

4.10. Оценка чувствительности микроорганизмов к ДС in vitro суспензионным микрометодом.

В исследованиях используют стерильные 96-луночные планшеты и автоматические дозаторы со стерильными наконечниками.

Подготовку рабочего раствора ДС, нейтрализатора, культуры микроорганизма проводят в соответствии с п. п. 4.2 - 4.5.

В первую лунку планшета вносят 0,18 см³ раствора ДС в минимальной бактерицидной концентрации, указанной в Инструкции. Во вторую лунку вносят раствор нейтрализатора, в третью лунку - стерильную водопроводную воду в таком же количестве.

Затем в первую лунку, содержащую раствор ДС, вносят 0,02 см³ суспензии микроорганизма с концентрацией 1 x 10⁹ клеток в 1 см³ и тщательно перемешивают содержимое пипетированием. Выдерживают экспозицию, указанную в Инструкции для данной концентрации.

По истечении времени воздействия ДС с помощью дозатора 0,02 см³ содержимого из первой лунки переносят в лунку с нейтрализатором и тщательно перемешивают, выдерживают 10 мин, после чего 0,02 см³ переносят в третью лунку со стерильной водопроводной водой. Выдерживают 10 мин и далее делают высевы по 0,1 см³ содержимого в стерильную пробирку с 5 см³ жидкой питательной среды и чашку Петри с плотной питательной средой.

Инкубируют посевы в термостате при температуре плюс (37 1) °C на плотной питательной среде: бактерии - 24 - 48 ч, грибы - 7 суток, на жидкой питательной среде - 7 суток.

Оценивают результаты опыта по наличию или отсутствию роста микроорганизмов в жидкой и на плотной питательных средах: на плотной среде подсчитывают количество выросших колоний, проводят сравнение с контролем, которым является посев микроорганизмов в питательную среду без обработки ДС. Наличие роста на жидкой питательной среде определяют по изменению ее внешнего вида в сравнении с контролем.

Результаты исследований регистрируют в рабочем журнале и оформляют в виде протокола.

Чувствительным микроорганизмом считают тот, который погибает от воздействия выбранной концентрации ДС в трех повторностях эксперимента при наличии типичного роста тест-культуры в контроле.

4.11. Определение чувствительности микроорганизмов к ДС in vitro с использованием нейтрализующей питательной среды по Ди-Ингли.

В исследовании используются 12-луночные стерильные планшеты. Подготовку рабочего раствора ДС, нейтрализатора, культуры микроорганизма проводят в соответствии с п. п. 4.2 - 4.5.

С помощью стерильной пипетки в лунки 12-луночного планшета вносят по 0,1 см³ микробной взвеси с концентрацией 1 x 10⁹ клеток в 1 см³. Далее подсушивают взвесь микроорганизмов на внутренней поверхности лунки в течение 45 - 60 мин при комнатной температуре плюс (22,0 2,0) °C и влажности помещения 40 - 60%. После подсушивания в лунки первых двух рядов - A и B (опытные лунки) стерильной пипеткой вносят по 0,5 см³ рабочего раствора исследуемого ДС в соответствии с Инструкцией, после чего выдерживают время экспозиции, согласно испытываемому режиму дезинфекции. В лунки третьего ряда - C (контрольные лунки) вносят по 0,5 см³ стерильной водопроводной воды. По истечении времени экспозиции во все лунки планшета, включая третий, нижний ряд - C (контрольные лунки), стерильной пипеткой вносят по 5 см³ нейтрализующего бульона по Ди-Ингли или растопленного и остуженного до 45 °C агара по Ди-Ингли. Затем 12-луночный планшет с посевами помещают в термостат и инкубируют при температуре плюс (37 1) °C в течение 24 - 48 ч на плотной питательной среде и до 7 суток на жидкой питательной среде.

Результаты оценивают по наличию или отсутствию роста микроорганизмов в жидкой и на плотной питательной средах. Сравнение проводят с контролем, которым являются посевы тест-микроорганизмов в лунках ряда C без обработки ДС.

Чувствительными считают микроорганизмы при отсутствии характерного роста микроорганизмов в опытных лунках в трижды повторенном опыте и наличии характерного роста в контрольных лунках. Устойчивыми считают микроорганизмы при наличии характерного роста в опытных и в контрольных лунках в трижды повторенном опыте.

4.12. Метод выявления молекулярно-генетических маркеров устойчивости бактерий к КПАВ у микроорганизмов, циркулирующих в медицинских организациях.

Работы по проведению исследований методом ПЦР осуществляют в соответствии с методическими документами <10>. Утилизацию исходных субстратов и отходов проводят в соответствии с санитарно-эпидемиологическими требованиями <11>, а также методическими документами <12>.

--------------------------------

<10> МУ 1.3.2569-09 "Организация работы лабораторий, использующих методы амплификации нуклеиновых кислот при работе с материалом, содержащим микроорганизмы I - IV групп патогенности", утвержденные руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главным санитарным врачом Российской Федерации 22.12.2009.

<11> Глава X СанПиН 2.1.3684-21 "Санитарно-эпидемиологические требования к содержанию территорий городских и сельских поселений, к водным объектам, питьевой воде и питьевому водоснабжению, атмосферному воздуху, почвам, жилым помещениям, эксплуатации производственных, общественных помещений, организации и проведению санитарно-противоэпидемических (профилактических) мероприятий", утвержденных постановлением Главного государственного санитарного врача Российской Федерации от 28.01.2021 N 3 (зарегистрировано Минюстом России 29.01.2021, регистрационный N 62297), с изменениями, внесенными постановлениями Главного государственного санитарного врача Российской Федерации от 26.06.2021 N 16 (зарегистрировано Минюстом России 07.07.2021, регистрационный N 64146), от 14.12.2021 N 37 (зарегистрировано Минюстом России 30.12.2021, регистрационный N 66692), от 14.02.2022 N 6 (зарегистрировано Минюстом России 17.02.2022, регистрационный N 67331).

<12> МР 2.1.0246-21 "Методические рекомендации по обеспечению санитарно-эпидемиологических требований к содержанию территорий городских и сельских поселений, к водным объектам, питьевой воде и питьевому водоснабжению, атмосферному воздуху, почвам, жилым помещениям, эксплуатации производственных, общественных помещений, организации и проведению санитарно-противоэпидемических (профилактических) мероприятий", утвержденные руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации 17.05.2021.

Выделение нуклеиновых кислот из бактериальной культуры проводят в соответствии с инструкцией по применению выбранного набора реагентов. Очищенную ДНК хранят в течение недели при температуре плюс 2 - 8 °C и в течение 1 года при температуре не выше минус 16 °C.

Подготавливают и маркируют необходимое количество пробирок с оптически-прозрачной плоской крышкой вместимостью 0,2 см³ или планшет для ПЦР. Размораживают реагенты из используемого набора для проведения ПЦР с флуоресцентно-мечеными зондами и приготавливают реакционную смесь в соответствии с инструкцией к набору из расчета 0,025 см³ смеси на один образец ДНК. Добавляют к реакционной смеси праймеры и зонд для определенного гена семейства qac и гена 16S pPHK (внутренний контроль амплификации) до конечной концентрации 0,5 мкМ для каждого праймера и 0,25 мкМ для каждого зонда. Нуклеотидные последовательности праймеров и зондов для каждого гена указаны в таблице 4.

Содержимое пробирки с реакционной смесью тщательно перемешивают и центрифугируют в течение 3 - 5 сек на микроцентрифуге-вортексе, после чего переносят по 0,020 см³ реакционной смеси в пробирки или планшет для ПЦР и добавляют по 0,005 см³ образца ДНК в каждую из них. В пробирку отрицательного контроля добавляют 0,005 см³ деионизированной воды, свободной от нуклеаз. Пробирки закрывают, тщательно перемешивают содержимое и центрифугируют в течение 3 - 5 сек на микроцентрифуге-вортексе.

Таблица 4

Последовательности праймеров и зондов

Пробирки с реакционной смесью переносят в амплификатор с детекцией в режиме реального времени. Амплификацию проводят с учетом рекомендаций к используемому набору реактивов для ПЦР (таблица 5).

Таблица 5

Параметры программы амплификации

Используют 2 канала детекции для каждого образца ДНК - FAM и Cy5, HEX и Cy5 или ROX и Cy5, в зависимости от выявляемого гена семейства qac (см. таблицу 4). Результаты тестирования интерпретируют согласно таблице 6.

Таблица 6

Интерпретация результатов ПЦР

Госпитальные штаммы, у которых были обнаружены гены семейства qac, рассматриваются как потенциально устойчивые к КПАВ, что рекомендуется подтверждать результатами оценки их чувствительности к ДС с помощью бактериологического анализа.