II. Метод проведения исследования микробной обсемененности объектов внешней среды

3.1. Бактериологическое исследование микробной обсемененности объектов внешней среды предусматривает определение бактерий группы кишечных палочек (общих колиформных бактерий, термотолерантных колиформных бактерий), S. aureus, общей бактериальной обсемененности (общего микробного числа). По эпидемиологическим показаниям номенклатура исследований микробной обсемененности объектов внешней среды может быть расширена.

3.2. Методика посева смывов на бактерии группы кишечных палочек (общие колиформные бактерии, термотолерантные колиформные бактерии).

Для выявления бактерий группы кишечных палочек (далее - БГКП) производят посевы смывов на среду Кесслер или КОДА, при этом в пробирку со средой опускают тампон и переносят 0,2 - 0,3 см³ смывной жидкости. Посевы на средах Кесслер или КОДА инкубируют при температуре (37 1) °C в течение 18 - 24 часов. После инкубации из газ-положительных пробирок со среды Кесслер производят высев на плотную дифференциальную среду Эндо, со среды КОДА высев производят только в случае изменения окраски среды или ее помутнения. Среду Эндо инкубируют при температуре (37 1) °C в течение 18 - 24 часов. Из колоний, подозрительных или типичных для БГКП, готовят мазки, окрашивают по Граму и микроскопируют либо ставят тест Грегерсена, выполняют оксидазный тест. В случае обнаружения в препаратах грамотрицательных, не образующих спор палочек дают заключение о том, что в смывах присутствуют БГКП. При отсутствии признаков роста - газообразования или изменения цвета среды - дают заключение об отсутствии в смывах БГКП.

В случае исследования на общие колиформные бактерии (далее - ОКБ) и термотолерантные колиформные бактерии (далее - ТКБ), после взятия смыва тампон помещают на 10 - 15 мин в пробирку с раствором нейтрализатора (по п. 2.3), затем переносят в пробирку с питательной средой, погрузив тампон в пептонную воду или другую допустимую смачивающую среду по п. 2.3 и инкубируют при температуре (37 1) °C в течение 18 - 24 часов. После инкубации проводят высев на среду Эндо с последующей инкубацией при температуре (37 1) °C в течение 18 - 24 часов. При наличии роста на среде Эндо, проводят исследование выросших колоний на оксидазную активность и микроскопию, окрашенного по Граму препарата, или постановку теста Грегерсена. В случае обнаружения оксидазоотрицательных и грамотрицательных палочек определяют ферментациию лактозы до кислоты и газа. Для подтверждения наличия ОКБ посев инкубируют при температуре (37 1) °C в течение 48 часов, для подтверждения наличия ТКБ посев осуществляют в среду, предварительно прогретую до температуры (43 - 44) °C, и инкубируют при температуре (44 0,5) °C в течение 24 часов. При обнаружении кислоты и газа дают положительный ответ.

3.3. Методика посева на общую бактериальную обсемененность (общее микробное число).

Для определения общей бактериальной обсемененности (общего микробного числа) поверхностей 1,0 см³ смывной жидкости помещают в чашку Петри и заливают расплавленным питательным агаром. Чашки помещают в термостат при температуре (30 1) °C. Предварительный подсчет выросших колоний производят через 48 часов, окончательный - через 72 часа. Количество колоний, выросших на чашке, умножают на 10 для определения общего количества бактерий, содержащихся на поверхности исследуемого предмета.

3.4. Методика посева на S. aureus.

Для выявления S. aureus делают высев 0,2 - 0,3 см³ смывной жидкости в пробирку с 5,0 см³ 6,5% солевого бульона. Засеянные пробирки инкубируют при при температуре (37 1) °C в течение 18 - 24 часов, после чего делают высев на одну из агаризованных селективно-диагностических сред: молочно-солевой агар (МСА), стафилококкагар, манитолагар, агар Байд-Паркер, яично-желточно-азидный агар, желточно-солевой агар (ЖСА) или другие питательные среды, предназначенные для роста стафилококков, разрешенных к применению в установленном порядке. Чашки с посевами инкубируют при температуре (37 1) °C в течение 18 - 48 часов.

Для подтверждения принадлежности колоний к S. aureus подозрительные колонии отсевают на скошенный в пробирке питательный агар для дальнейшего исследования. Инкубируют при температуре (37 1) °C в течение 18 - 24 часов.

После инкубации у выделенных штаммов проверяют морфологию, тинкториальные свойства (окраска по Граму или тест Грегерсена) и наличие плазмокоагулирующей активности в реакции плазмокоагуляции (РПК).

Идентификация и подтверждение видовой принадлежности S. aureus возможна с применением биохимической лабораторной идентификации, коммерческих тест-системы идентификации, методов иммуноферментного анализа, разделенного импеданса, масспектрометрии или микробиологических анализаторов в соответствии с действующими методическими документами и инструкциями производителей.

3.5. При проведении исследований объектов внешней допускается использование готовых и дегидратированных питательных сред, в том числе хромогенных, зарегистрированных в установленном порядке.