11.6.1. Инсеминация ооцитов in vitro - экстракорпоральное оплодотворение (метод ЭКО)

Инсеминация ооцитов методом экстракорпорального оплодотворения заключается в совместном культивировании ооцитов и сперматозоидов, прошедших капацитацию in vitro.

- Рекомендуется использовать классический метод ЭКО при нормозооспермии и умеренной патозооспермии.

Уровень доказательности 4C.

Комментарий:

одни специалисты ориентируются на количество подвижных сперматозоидов в нативном эякуляте (> 1 x 10⁶), другие - на количество подвижных сперматозоидов в обработанной сперме (> 0,2 - 0,5 x 10⁶), третьи - на концентрацию и морфологию сперматозоидов в нативном образце (> 0,5 x 10⁶ морфологически нормальных прогрессивно-подвижных сперматозоидов в миллилитре) [126], [127], [128], [129].

- Для обработки спермы рекомендуется использовать такие методы, как центрифугирование в градиенте плотности и swim-up ("всплытие") [130].

Уровень доказательности 4C.

Комментарии:

рекомендовано придерживаться минимального объема при добавлении суспензии сперматозоидов для снижения риска аномального оплодотворения.

- После получения ооцит-кумулюсных комплексов (ОКК) необходимо провести предварительный нагрев сред для их отмывания до 37 °C и поддерживать постоянную температуру в пробирке, в которую помещают ОКК после аспирации, и чашке Петри, где проводится поиск и идентификация ОКК. Длительное культивирование ОКК в фолликулярной жидкости не рекомендовано [131].

Уровень доказательности 4A.

Комментарии:

необходимо подробно изучить инструкции по используемым средам в лаборатории ВРТ;

для снижения риска разрушения веретена деления в ооците все работы с ооцит-кумулюсными комплексами необходимо проводить при температуре 37 °C.

- Для процедуры инсеминации рекомендуется использовать капли со взвесью обработанных сперматозоидов с концентрацией подвижных форм в интервале от 0,1 до 0,5 x 10⁶/мл. На одну яйцеклетку должно приходиться от 10 до 50 тысяч сперматозоидов [132].

Уровень доказательности 4C.

- Рекомендуется проводить совместное культивирование ооцитов и сперматозоидов в течение 3 часов ("короткая инкубация"), хотя допускается традиционный вариант длительной инкубации (16 - 20 часов) [131], [133].

Уровень доказательности 1A.

- Рекомендуется проводить оценку оплодотворения (подсчет пронуклеусов в каждой зиготе) через 16 - 20 часов после инсеминации [132].

Уровень доказательности 1A.

Комментарии:

при проведении оплодотворения традиционным методом ЭКО клетки кумулюса необходимо предварительно очистить для лучшей визуализации пронуклеусов;

оценка оплодотворения и качества эмбрионов должна проводиться на инвертированном микроскопе или эквивалентной оптике при высоком увеличении (рекомендованное минимальное увеличение - 200x; более предпочтительное увеличение - 400x);

при проведении оценки качества эмбрионов на стадии дробления необходимо учитывать число бластомеров, их размер и симметричность, процент фрагментации эмбриона, наличие цитоплазматических аномалий (грануляция, вакуолизация и мультинуклеация в бластомерах эмбриона);

оценка качества на стадии бластоцисты включает оценку размера кавитации бластоцели, количества клеток трофэктодермы (ТФЭ) и внутриклеточной массы (ВКМ) [131].

- Рекомендуется проводить культивирование в инкубаторе при низких концентрациях кислорода, так как это влияет на увеличение частоты рождения [103].

Уровень доказательности 4A.

Комментарий:

результаты многих исследований демонстрируют убедительные данные увеличения частоты рождаемости при культивировании в инкубаторах со сниженным содержанием кислорода (5 - 7%) по сравнению со стандартным культивированием (21%).