6. Условия хроматографии и калибровка хроматографической колонки

6. Условия хроматографии и калибровка

хроматографической колонки

Хроматографическая колонка калибруется по стандартным глобулярным водорастворимым белкам известной молекулярной массы по времени удерживания (или расстоянию максимума пика на ленте самописца). Строится калибровочная кривая зависимости десятичного логарифма молекулярной массы от времени удерживания (или расстояния на ленте самописца), как это показано на рис. 1 (здесь и далее рисунки не приводятся).

Условия хроматографии следующие: скорость элюирования 0,2 куб. см/мин., ультрафиолетовый проточный детектор 115UV (280 нм), объем образца, инжектируемого в колонку, 100 мкл.

В качестве элюента используется 0,2 М раствор NaCl. Элюент готовится следующим образом: в колбу емкостью 1000 куб. см вносится 24,0 г натрия хлорида, добавляется 600 куб. см дистиллированной воды. После полного растворения объем доводится до 1000 куб. см дистиллированной водой. Полученный раствор отфильтровывается через фильтр с размером пор 0,45 мкм.

В откалиброванную колонку инжектируется 100 куб. мкм раствора обезжиренного и отфильтрованного, как описано в разделе 5, сырого коровьего молока и получаемая хроматограмма (рис. 2) используется как эталонный образец сырого коровьего молока для сравнения с хроматограммами таким же образом обезжиренного и отфильтрованного коровьего молока анализируемых образцов.