Приложение 1

к МР 4.2/3.1.0422-26

РЕКОМЕНДУЕМЫЙ АЛГОРИТМ
СБОРА, ТРАНСПОРТИРОВКИ И ХРАНЕНИЯ ОБРАЗЦОВ КЛИНИЧЕСКОГО,
БИОЛОГИЧЕСКОГО, АУТОПСИЙНОГО И СЕКЦИОННОГО МАТЕРИАЛА

1. Материалом для исследования служит клинический материал (мазки со слизистой оболочки носоглотки (ротоглотки), мокрота, аспираты из зева, эндотрахеальный аспират, бронхоальвеолярная жидкость, промывные воды бронхов, мазки с конъюнктивы), фекалии, сыворотка крови; аутопсийный материал (ткани легких, трахеи, сегментарных бронхов, селезенки); биологический материал от птиц и других животных (трахеальные и клоакальные мазки; пробы фекалий; биологические жидкости и фрагменты внутренних органов птиц, птенцов; яйца птиц; фекалии птиц и (или) мазок из клоаки и трахеи; околоводные биотопы мелких млекопитающих; фрагменты трахеи, легких, селезенки, мозга, синусы, воздухоносные мешки, кишечник от забитой или павшей птицы, птенцов, а также мелких млекопитающих); вода и ил в местах гнездований дикой птицы; молоко коров.

2. Сбор клинических и аутопсийных образцов проводят в соответствии с санитарно-эпидемиологическими требованиями <29>, а также методическими документами <30>. Мазки из носоглотки человека для лабораторного исследования вируса гриппа собирают стерильными зондами с вискозными тампонами со слизистой оболочки из нижнего носового хода. Зонд с тампоном вводят легким движением по наружной стенке носа на глубину 2 - 3 см до нижней раковины, слегка опускают книзу, вводят в нижний носовой ход глубоко и удаляют вдоль наружной стенки носа. Общая глубина введения зонда должна составлять примерно половину расстояния от ноздри до ушного отверстия (3 - 4 см для детей и 5 - 6 см для взрослых). После взятия материала тампон, не нарушая стерильности, помещают в пробирку с 2,0 - 5,0 мл вирусологической транспортной среды. Мазок с конъюнктивы собирают следующим образом: оттянув нижнее веко, проводят тампон вращающими движениями по конъюнктиве 4 - 5 раз, захватывая внутренний и внешний углы глаза. Затем переносят тампон в пробирку с транспортной средой. Взятие клинического материала с целью выделения вирусов следует проводить не позднее трех дней от начала заболевания или в первый день госпитализации, предпочтительно до начала противовирусной терапии.

--------------------------------

<29> Пункты 520 - 530, приложения 9-10 СанПиН 3.3686-21.

<30> Письмо Главного государственного санитарного врача Российской Федерации "О направлении рекомендаций по отбору проб на респираторные вирусы" от 26.09.2017 N 01/12890-17-32; МР 3.1.0117-17; методические рекомендации "Выделение вирусов гриппа в клеточных культурах и куриных эмбрионах и их идентификация", утвержденные руководителем Федеральной службой по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека 18.04.2006 N 0100/4430-06-34).

3. Мазки из клоаки и трахеи птиц берут сухими стерильными зондами с ватными тампонами. Трахеальные мазки берут из дыхательного прохода (трахеи) в задней части ротовой полости птицы. Чтобы добиться его раскрытия, необходимо слегка вытянуть язык птицы вперед, что сделает трахею в задней части языка более доступной. После того, как птица сделает вздох, хрящ, защищающий трахею, открывается. После этого в нее вводят наконечник аппликатора, затем осторожным движением по стенкам и задней части трахеи берут мазок. Клоакальные мазки берут путем введения всего наконечника аппликатора внутрь клоаки и поворачивания его там двумя или четырьмя круговыми движениями. Прежде чем поместить мазок в криопробирку, с наконечника аппликатора аккуратно стряхивают крупные частицы помета.

4. Мазки из носа свиней и крупного рогатого скота берут последовательно с задних стенок обеих ноздрей возвратно-поступательными вращающими движениями. Зонд вводят в ноздрю животного на 5 - 7 см. Взятый мазок помещают в 1 мл стерильного фосфатно-солевого буферного раствора или транспортной среды в стерильные одноразовые промаркированные криопробирки (мазок от каждой особи помещают в отдельную пробирку). После этого стержень отрезают или отламывают таким образом, чтобы конец аппликатора остался в транспортной среде, а криопробирка могла быть герметично укупорена.

5. Для отбора пробы молока часть разового удоя молока сразу после окончания дойки переливается в определенную емкость и тщательно перемешивается. Штативы с пробами молока должны храниться и транспортироваться при температуре плюс 4 °C до 48 часов, при температуре минус 20 °C до 7 суток.

6. Все мазки (человека и животных) до исследования хранят при температуре плюс 2 - 8° С не более 48 часов, при необходимости более длительного хранения - при температуре не выше минус 70 °C.

7. Образцы фекалий птиц собирают стерильным шпателем или стерильной ватной палочкой в пробирку. Объем образца составляет приблизительно 1 мл. Пробы собирают как в случае регистрации отдельных особей птиц, так и при взлете моновидовой стаи, при этом всегда фиксируется вид птицы. Обязательно отбирается единичный (отдельный) образец свежих, невысохших фекалий.

8. Аутопсийный материал из зоны поврежденной ткани и секционный материал (внутренние органы животных, фрагменты трахеи, легких, мозга, кишечника) забирают объемом 1 - 3 мл стерильными инструментами (индивидуально для каждого органа), помещают в одноразовые стерильные пробирки с герметично завинчивающейся крышкой, замораживают и хранят при температуре не выше минус 40 °C.

9. Сбор аутопсийного и секционного материала следует проводить в герметично-закрывающиеся пробирки или контейнеры. Для этой цели хорошо подходят стандартные лабораторные пластиковые (полипропиленовые) пробирки типа Фалькон на 15 или 50 мл с герметично завинчивающимися крышками или аналогичные пробирки на 5 мл. При использовании пробирок с завинчивающимися крышками на 1,5 - 2 мл предпочтительно использовать крышки с уплотнительным кольцом, обеспечивающим герметичное закрытие и предотвращающим протекание материала. Не рекомендуется использовать для сбора аутопсийного и секционного материала контейнеры для общего анализа мочи, которые закрываются негерметично, что приводит к протеканию материала в случае транспортировки на дальние расстояния. При упаковке материала следует руководствоваться санитарно-эпидемиологическими требованиями <31>.

--------------------------------

<31> Приложение 8 СанПиН 3.3686-21.

10. Следует избегать оттаивания и повторного замораживания материала во время хранения и транспортирования, поскольку это приводит к утрате вирусами жизнеспособности. Транспортирование при температуре плюс 2 - 8 °C допускается не более 24 часов. При необходимости более длительной транспортировки следует обеспечить температуру не выше минус 70 °C (с использованием сухого льда, при этом биологический материал должен быть помещен в криопробирки и упакован согласно руководству ВОЗ "Перевозка инфекционных материалов" <32>. В контейнер с целью поддержания холодовой цепи помещают одноразовый индикатор, контролирующий соблюдение требуемой температуры.

--------------------------------

<32> WHO/HSE/GCR/2015.2 Рекомендации по правилам перевозки инфекционных материалов 2015 - 2016 гг.

11. Следует помнить, что транспортные среды для ПЦР-исследования не подходят для сбора проб с целью выделения вируса в культуре клеток или КЭ, так как компоненты таких транспортных сред приводят к инактивации вируса.

Транспортные вирусологические среды.

11.1. При сборе проб с целью последующего выделения вирусов гриппа следует забирать образцы в специальную транспортную вирусологическую среду. Обычно используют коммерческую транспортную среду (сваб-система) или изготовливают самостоятельно в лаборатории. Среды могут быть приготовлены на основе питательных сред для культивирования клеток, или сбалансированного солевого раствора Хэнкса, или фосфатно-солевого буфера, или триптозо-фосфатного бульона. К данным средам и буферным растворам необходимо добавлять бычий сывороточный альбумин до концентрации 0,5% для стабилизации вируса. Также в транспортную среду добавляют антибиотики и антимикотики.

11.2. Пример транспортной вирусологической среды.

Питательная среда для культивирования клеток 199 (или DMEM, или MEM).

Бычий сывороточный альбумин, фракция V (конечная концентрация 0.5%).

Гентамицин (конечная концентрация 100 - 200 мкг/мл) или Пенициллин (конечная концентрация 100 ЕД/мл), Амфотерцин В (конечная концентрация 0,25 мкг/мл).

11.3. Для приготовления транспортной среды может использоваться либо бычий сывороточный альбумин (фракция V) в сухом виде, либо коммерчески-доступный готовый стерильный раствор бычьего сывороточного альбумина (7,5%). В случае, если при приготовлении транспортной среды используются нестерильные реагенты (например, альбумин в сухом виде), необходимо стерилизовать приготовленную транспортную среду посредством стерилизующей фильтрации через фильтр с размером пор 0,22 мкм.

11.4. После приготовления вирусологическую транспортную среду аликвотируют в одноразовые стерильные пробирки из полипропилена стерильным наконечником в стерильных условиях (в боксе микробиологической безопасности 1 класса) по 1,0 мл (при использовании пробирок объемом 1,5 - 2 мл) или по 2,0 - 5,0 мл (при использовании пробирок объемом 5 - 15 мл), маркируют и хранят до использования при температуре плюс 2 - 8 °C.

Маркировка материала для лабораторного исследования.

На этикетке пробирок (контейнеров) с материалом указывается: порядковый номер образца, соответствующий номеру в сопроводительном документе, и тип биоматериала. В сопроводительном документе (направлении) к биоматериалу, собранному от людей для исследования в лаборатории, необходимо указать: наименование учреждения, которое направляет клинический материал на исследования, телефон, адрес электронной почты; возраст или дата рождения; пол; дату взятия биоматериала для лабораторного исследования; тип материала; дату заболевания; предварительный клинический диагноз или повод к обследованию; степень тяжести заболевания; данные о вакцинации против гриппа в текущем эпидемическом сезоне (вакцинирован/не вакцинирован/нет данных); проводилась ли специфическая противовирусная терапия, название использовавшихся противовирусных препаратов; ФИО, должность сотрудника, отправившего биоматериал, дату отправки биоматериала и контактный телефон, по которому можно связаться с данным сотрудником.

Маркировка биологического материала от птиц (животных) включает в себя: полевой номер образца, время и место сбора, вид птицы (животного), от которой взята проба, тип биоматериала.

Транспортирование клинического и (или) биологического материала.

При необходимости транспортирования внутри одного здания, пробирки/контейнеры с материалом помещают в штативы и специальные герметичные контейнеры-переноски. Транспортирование производится при температуре плюс 4 - 8 °C в течение 24 часов, более длительно - в замороженном состоянии в контейнере с сухим льдом. В этом случае образцы каждого пациента (или животного) помещают в индивидуальную герметичную емкость с адсорбирующим материалом и дополнительно упаковывают в общую герметичную тару, помещаемую в термоконтейнер. Минимальные размеры наружной тары должны быть не менее чем 10 x 10 см. Сопроводительные документы помещаются в индивидуальную упаковку отдельно от клинического или/и биологического материала и прочно прикрепляются снаружи контейнера.

Оценка приемлемости образцов.

После доставки образца в лабораторию сотрудник лаборатории, принимающий материал, должен проверить правильность оформления направления на исследование, маркировку пробирок с образцами исследуемого материала, их целостность, и зарегистрировать поступивший материал. Нумерация образцов при регистрации должна быть идентична нумерации в бланках направлений на лабораторное исследование.

Непригодными для исследования являются образцы:

- немаркированные или несущие неверную (нечитаемую) маркировку;

- хранившиеся и транспортировавшиеся с нарушением требований, установленных для данного типа материала;

- с нарушением целостности и (или) герметичности тары (например, пробирок) (в том числе пролитые образцы).

В случае непригодности доставленного образца необходимо уведомить отправителя образца и рекомендовать повторное взятие материала с соблюдением всех перечисленных правил.