Приложение 4

к МР 4.2/3.1.0422-26

ПРИМЕНЕНИЕ
БЕТА-ПРОПИОЛАКТОНА ДЛЯ ИНАКТИВАЦИИ ВИРУСА ГРИППА И ПОРЯДОК
ПРОВЕРКИ ПОЛУЧЕННОГО АНТИГЕНА НА ОСТАТОЧНУЮ ИНФЕКЦИОННОСТЬ

1. Бета-пропиолактон (англ. beta-propiolactone, далее - BPL) представляет собой высокоактивный алкилирующий агент, нестойкий в водных растворах и легко гидролизуемый с образованием безвредных веществ: гидроакриловой и бета-оксипропионовой кислот. В связи с этим отпадает необходимость в нейтрализации избытка бета-пропиолактона и продуктов его распада.

2. Бета-пропиолактон оказывает инактивирующее действие на многие вирусы. При оптимальной концентрации бета-пропиолактона снижается инфекционность вируса гриппа без существенного изменения его гемагглютинирующей, нейраминидазной и гемолизирующей активности.

3. Инактивация вирусов бета-пропиолактоном зависит от концентрации инактиватора, температуры взаимодействия и содержания белка в вирусной суспензии. Повышение концентрации бета-пропиолактона может привести к нежелательной реакции с вирусными белками и, вследствие этого, к изменению антигенных свойств.

4. Для инактивации используют водный стоковый раствор BPL. При работе с бета-пропиолактоном необходимо использовать защитные перчатки (нитриловые или латексные), так как BPL обладает канцерогенными свойствами. Раствор BPL держат на льду до использования.

5. В БМБ II класса к вируссодержащей жидкости добавить инактивирующий агент BPL до конечной концентрации 0,05% V/V (промежуточные разведения BPL можно готовить с использованием охлажденной дистиллированной воды (температура плюс 4 - 8 °C). Тщательно перемешивают вируссодержащую жидкость, чтобы обеспечить наибольший контакт вируса с BPL.

6. Помещают суспензию в водяную баню на два часа при температуре плюс 36,5 - 37,5 °C, периодически помешивая.

7. Хранят инактивированный антиген при температуре минус 20 °C до использования.

8. Для работы антиген размораживают и хранят при температуре плюс 4 - 8 °C не больше месяца.

9. Чтобы работать с антигеном в помещениях, отвечающих требованиям I уровня биологической безопасности, необходимо провести тест на остаточную инфекционность антигена. Для подтверждения инактивации вирусов гриппа следует провести два - три пассажа в куриных эмбрионах или на культуре клеток MDCK. При отсутствии гемагглютинации в двух пассажах, третий пассаж можно не проводить.