Приложение 2

к МР 1.2.0344-24

ПРИМЕР
ПРОЦЕДУРЫ ПОДГОТОВКИ БИОЛОГИЧЕСКИХ ПРОБ
ДЛЯ ХРОМАТОГРАФИЧЕСКОГО ИССЛЕДОВАНИЯ
С МАСС-СПЕКТРОМЕТРИЧЕСКИМ ДЕТЕКТИРОВАНИЕМ

2.1. Подготовка фракции полярных метаболитов веществ крови: 100 мм³ сыворотки или плазмы, отогретой при температуре плюс 4 °C, смешивают с 300 мм³ предварительно охлажденной до минус 20 °C смеси ацетон-метанол, взятых в объемном соотношении 3:7. Смесь перемешивают и выдерживают в течение 30 минут при температуре 0 °C. После этого центрифугируют при 14000 об/мин в течение 10 минут при температуре плюс 4 °C, надосадок собирают и переносят в предварительно охлажденную на льду хроматографическую виалу.

2.2. Подготовка фракции неполярных метаболитов веществ крови: к 100 мм³ сыворотки или плазмы крови, отогретой при температуре плюс 4 °C, добавляют 100 мм³ предварительно охлажденного до плюс 4 °C 0,09% раствора хлорида натрия и 1 см³ предварительно охлажденной до минус 20 °C смеси хлороформ-метанол, взятых в объемном соотношении 2:1. Смесь перемешивают и выдерживают в течение 30 минут при температуре 0 °C. После этого пробу центрифугируют при 7800 об/мин в течение 3 минут при температуре плюс 4 °C. Отделившийся нижний слой пробы отбирают и переносят в предварительно охлажденную на льду хроматографическую виалу.

2.3. Тканевый материал перед анализом предварительно измельчают: навеску замороженной ткани перетирают в предварительно охлажденной жидким азотом ступке до порошкообразного состояния, после чего добавляют: для получения фракции полярных метаболитов веществ - смесь ацетон-метанол (см. п. 6.4) в соотношении 300 мм³ смеси на 100 мг ткани; для получения фракции неполярных метаболитов веществ - раствор хлорида натрия 0,09% и смесь хлороформ-метанол в соотношении на 100 мг ткани 100 мм³ 0,09% NaCl и 1 см³ смеси хлороформ/метанол на 100 мг ткани. После добавления смеси экстрагентов подготовка проб ведется в соответствии с п.п. 2.1 и 2.2.