IX. Учет и интерпретация результатов анализа

9.1. На основании значений порогового цикла Ct (пересечение кривой флуоресценции с установленной на соответствующем уровне пороговой линией, которая устанавливается в середине линейного участка прироста флуоресценции положительного контроля в логарифмической шкале) и исходя из заданных значений калибраторов происходит автоматическое построение калибровочной прямой и расчет значений копий TREC, KREC и генов внутреннего контроля в образце ПЦР.

9.2. Эффективность ПЦР рекомендуется от 95 до 105%. Коэффициент корреляции R² - не меньше 0,97. Если эти условия не соблюдаются, результат постановки ПЦР считается недостоверным. Рекомендуется перестановка ПЦР для всех проб.

9.3. Количество копий TREC (KREC) рассчитывается на 10⁵ ядросодержащих клеток с учетом одного гена внутреннего контроля по формулам 2, 3:

Количество TREC = (количество копий TREC / количество копий

эндогенного контроля) x 200000; (2)

Количество KREC = (количество копий KREC / количество копий

эндогенного контроля) x 200000. (3)

9.4. Количество копий TREC (KREC) рассчитывается на 10⁵ ядросодержащих клеток с учетом двух генов внутреннего контроля на соматических хромосомах по формулам 4, 5:

Количество TREC = ((4 * количество копий TREC) / (количество

копий эндогенного контроля один + количество копий

эндогенного контроля два)) x 100000; (4)

Количество KREC = ((4 x количество копий KREC) / (количество

копий эндогенного контроля один + количество копий

эндогенного контроля два)) x 100000. (5)

9.5. Количество копий TREC (KREC) рассчитывается на 10⁵ ядросодержащих клеток с учетом двух генов внутреннего контроля, в том числе одного гена внутреннего контроля на соматической хромосоме и одного гена внутреннего контроля на X-хромосоме, по формулам (6) для женского пола, (7) для мужского пола:

; (6)

, (7)

где: - количество TREC или KREC на 100 тысяч ядросодержащих клеток;

C₀ - исходная концентрация TREC или KREC в миллилитре образца;

C_X - исходная концентрация гена внутреннего контроля на X-хромосоме в мл образца;

C_C - исходная концентрация гена внутреннего контроля на соматической хромосоме в мл образца.

9.6. Полученные результаты сравнивают с пороговыми уровнями TREC и KREC, указанными в паспорте или инструкции используемого набора.

9.7. Для выявленных образцов с отсутствием или снижением уровней TREC и (или) KREC осуществляют подтверждение или опровержение полученного результата. Для этого проводят постановку ПЦР TREC и KREC повторно.