Выделение ДНК из цельной крови

6.2. При использовании для выделения ДНК из цельной крови коммерческих наборов, зарегистрированных и разрешенных для использования на территории Российской Федерации в установленном порядке <20>, основанных на лизисе клеток детергентами и преципитации нуклеиновых кислот, - процедура выполняется согласно инструкции к набору и осуществляется следующим образом:

--------------------------------

<20> Постановление Правительства Российской Федерации от 27.12.2012 N 1416; приказ Минздрава России N 4н.

1) перед проведением процедуры выделения ДНК из цельной крови требуется провести лизис эритроцитов с целью удаления гемоглобина, так как гемоглобин ингибирует ПЦР;

2) при необходимости (в случае образования в растворе для лизиса кристаллического осадка) прогреть при температуре плюс 65 °C раствор для лизиса до полного растворения кристаллов;

3) отобрать необходимое количество одноразовых пробирок на 1,5 мл с плотно закрывающимися крышками. Добавить в пробирки по 300 мкл раствора для лизиса. Промаркировать пробирки;

4) в пробирки с раствором для лизиса внести по 100 мкл подготовленных проб, используя наконечники с аэрозольным барьером;

5) содержимое пробирок тщательно перемешать на вортексе, центрифугировать в течение 5 с на микроцентрифуге для удаления капель с внутренней поверхности крышки. Поместить пробирки в термостат на 5 мин при температуре плюс 65 °C;

6) добавить по 400 мкл раствора для преципитации в каждую пробирку, содержимое пробирок перемешать на вортексе;

7) центрифугировать в течение 5 мин при 13000 об/мин;

8) отобрать надосадочную жидкость, не задевая осадок;

9) добавить в пробирки по 500 мкл раствора для первого этапа отмывки, плотно закрыть крышки, осторожно промыть осадок, переворачивая пробирки вверх дном 3 - 5 раз;

10) центрифугировать при 13000 об/мин в течение 1 - 2 мин на микроцентрифуге;

11) отобрать надосадочную жидкость. Добавить в пробирки по 200 мкл раствора для второго этапа отмывки, плотно закрыть крышки и осторожно промыть осадок, переворачивая пробирки 3 - 5 раз;

12) центрифугировать при 13000 об/мин в течение 1 - 2 мин на микроцентрифуге;

13) удалить надосадочную жидкость. Поместить пробирки с открытыми крышками в термостат при температуре плюс 65 °C на 5 мин для подсушивания осадка;

14) добавить в пробирки по 50 мкл РНК-буфера. Перемешать на вортексе. Поместить в термостат при температуре плюс 65 °C на 5 мин, периодически встряхивая на вортексе;

15) центрифугировать пробирки при 13000 об/мин в течение 1 мин на микроцентрифуге. Надосадочная жидкость содержит ДНК.

Выделенные образцы ДНК используются для проведения ПЦР, допускается хранение в соответствии с инструкцией используемого набора реагентов для выделения ДНК.