II. ОБЩИЕ ПОЛОЖЕНИЯ

2.1. Кожная сенсибилизация.

2.1.1. Механизм действия.

2.1.1.1. Развитие кожной сенсибилизации делится на две фазы: индукция и провокация (выявление). На этапе индукции у индивидуума повышается чувствительность к аллергенному агенту, приводящая к образованию T-клеток памяти, специфичных к аллергену. Специфические клетки памяти мигрируют в дерму и эпидермис для повторного столкновения со специфическим аллергеном. На этапе выявления T-клетки памяти, продуцированные при индукции, вновь сталкиваются со специфическим аллергеном, что приводит к быстрой пролиферации и активации аллерген-специфичных T-клеток. Активированные клетки начинают выделять специфические цитокины, которые мобилизуют другие воспалительные клетки, что приводит к клиническому исходу аллергического контактного дерматита.

2.1.1.2. В зависимости от структуры и природы химического вещества механизмы развития кожной сенсибилизации различны.

2.1.1.3. Механизмы воздействия металлов, приводящие к активации врожденной иммунной системы до конца не изучены. Некоторые типы ионов металлов могут действовать как неклассические гаптены, вызывая структурные изменения в молекула-пептидном комплексе главного комплекса гистосовместимости (далее - ГКГ) (путем образования комплекса металл-белок), которые затем приводят к распознаванию и активации T-клеток через T-клеточные рецепторы.

2.1.1.4. Гаптен, являясь полуантигеном, т.е. веществом, которое способно взаимодействовать с антителами, но не способно стимулировать выработку новых антител при введении в организм животных, превращается в полноценный антиген после ковалентного связывания с определенным белком носителем, который также является антигеном. Иммунизация организма гаптеном, связанным с носителем, вызывает появление антител как против носителя, так и против гаптена. Последний распознается иммуноглобулиновыми рецепторами B-лимфоцитов, что обеспечивает вовлечение в иммунный процесс специфических клонов данных клеток. Гаптены могут встраиваться в молекулы ГКГ антиген-представляющих клеток, которые стимулируют активность специфических клонов T-лимфоцитов.

2.1.1.5. Гаптены приобретают способность инициировать реакции гиперчувствительности замедленного типа (далее - ГЗТ) после взаимодействия с высокомолекулярными соединениями (с белками). Для развития реакций ГЗТ необходима предшествующая сенсибилизация, возникающая при первичном контакте с антигеном. При развитии ГЗТ происходит уплотнение и воспаление ткани, в результате ее инфильтрации T-лимфоцитами и макрофагами.

2.1.1.6. Для химических веществ, ковалентно связывающихся с белками кожи, разработана схема пути неблагоприятного исхода (англ. Adverse Outcome Pathway, далее - AOP), ключевыми событиями которого являются этапы (рис. 2.1):

- ковалентное связывание электрофильного вещества с белками кожи (ключевое событие 1);

- высвобождение противовоспалительных цитокинов и активация цитозащитных механизмов в кератиноцитах (ключевое событие 2);

- активация и созревание дендритных клеток и их миграция в региональные лимфатические узлы (ключевое событие 3);

- представление химического аллергена дендритными клетками (аллерген обрабатывается дендритной клеткой и отображается на ее поверхности в виде эпитопа) T-клеткам, что приводит к их дифференцировке и пролиферации в аллергенспецифические T-клетки памяти (ключевое событие 4);

- неблагоприятный исход (клиническое проявление аллергического контактного дерматита) (ключевое событие 5).

Рис. 2.1. Схема AOP для сенсибилизации кожи

(уровни биологической организации, реакции на воздействие

химического вещества, типичные исследования)

2.1.1.6.1. Каждое ключевое событие соответствует развитию кожного сенсибилизирующего действия на разном уровне биологической организации (молекулярный-клеточный-тканный-органный-организменный) и выявляется соответствующими методами исследования (см. приложение 1 к настоящим МР):

- ключевое событие 1: прямой анализ реакционной способности в отношении пептидов <3>; анализ истощения глутатиона; анализ образования аддуктов методом жидкостной хроматографии с масс-спектрометрией.

--------------------------------

<3> Метод Организации экономического сотрудничества и развития (англ. Organisation for Economic Co-operation and Development, OECD) (далее - ОЭСР) N 442C "Прямой анализ реакционной способности в отношении пептидов" (англ. OECD Test Guideline No. 442C "In Chemico Skin Sensitisation: Direct Peptide Reactivity Assay") (далее - Метод ОЭСР N 442C).

- ключевое событие 2: методы определения KeratinoSens люциферазы ARE-Nrf2 и LuSens люциферазы ARE-Nrf2 <4>.

--------------------------------

<4> Метод ОЭСР N 442D "Сенсибилизация кожи in vitro" (англ. OECD Test Guideline No. 442D "In Vitro Skin Sensitisation") (далее - Метод ОЭСР N 442D).

- ключевое событие 3: анализ активности дендритных клеток: тест активации клеточной линии человека (h-CLAT); тест активации клеточной линии U937 (U-SENS); анализ репортерного гена интерлейкина-8 (далее - анализ IL-8 Luc) <5>.

--------------------------------

<5> Метод ОЭСР N 442E "Сенсибилизация кожи in vitro" (англ. OECD Test Guideline No. 442E "In Vitro Skin Sensitisation") (далее - Метод ОЭСР N 442E).

- ключевое событие 4: анализ реакции региональных лимфатических узлов (англ. Local Lymph Node Assay, далее - LLNA) <6>; анализ реакции региональных лимфатических узлов путем измерения содержания (далее - LLNA: DA) аденозинтрифосфата (далее - АТФ) <7>; анализ реакции региональных лимфатических узлов по измерению скорости включения бромдезоксиуридина (далее - LLNA: BrdU-FCM) <8>.

--------------------------------

<6> Метод ОЭСР N 429 "Сенсибилизация кожи: анализ реакции региональных лимфатических узлов" (англ. OECD Test Guideline No. 429 "Skin Sensitization: Local Lymph Node Assay") (далее - Метод ОЭСР N 429).

<7> Метод ОЭСР N 442A "Сенсибилизация кожи: анализ реакции региональных лимфатических узлов: DA" (англ. OECD Test Guideline No. 442A "Skin Sensitization Local Lymph Node Assay: DA") (далее - Метод ОЭСР N 442A).

<8> Метод ОЭСР N 442B "Сенсибилизация кожи: анализ реакции региональных лимфатических узлов: BrdU-ELISA или - FCM" (англ. OECD Test Guideline No. 442B "Skin Sensitisation Local Lymph Node Assay: BrdU-ELISA or - FCM") (далее - BrdU-ELISA) (далее - Метод ОЭСР N 442B).

- ключевое событие 5: неблагоприятный исход на организменном уровне - максимизационный тест на морских свинках (англ. Guinea Pig Maximisation Test, далее - GPMT) и тест Бюхлера <9>; клинические проявления (симптомы) кожной сенсибилизации у людей.

--------------------------------

<9> Метод ОЭСР N 406 "Сенсибилизация кожи" (англ. OECD Test Guideline No. 406 "Skin Sensitisation") (далее - Метод ОЭСР N 406).

2.1.2. Клинические проявления.

2.1.2.1. Аллергический контактный дерматит.

Клиническими проявлениями являются, например, покраснение, сыпь, боль в пораженных областях, зуд, жжение, пузырьки с содержимым, сухость кожи, отечность.

В отличие от контактного дерматита, вызванного химическим веществом в результате раздражающего действия, аллергический контактный дерматит развивается через некоторое время. Реакции могут проявиться на 5 - 21 сутки после контакта с аллергеном. Локализация поражения кожи не ограничивается только местом контакта и характеризуется распространением на соседние участки.

2.1.2.2. Крапивница.

Клиническими проявлениями являются образование волдырей, представляющих собой возвышающиеся над поверхностью кожи бесполостные гиперемированные образования округлой или неправильной формы, возникающие на любом участке кожной поверхности, сопровождающиеся зудом. Проявляется в течение одного часа после контакта с аллергеном и исчезают бесследно в течение 24 часов.

2.1.2.3. Фиксированная эритема.

Клинические проявления - окрашенные пятна, диаметр которых может достигать 10 см с наличием бледной зоны в центре пятна, сопровождающиеся зудом или жжением. По мере регрессии пятна приобретают синюшно-багровый оттенок, в центре может образовываться бляшка или пузырь. После разрешения остается коричневатое пятно, которое проходит через продолжительное время (от нескольких месяцев до двух лет) и постепенно бледнеет. Возможно формирование высыпаний на слизистых. После повторного контакта с аллергеном пятна рецидивируют на прежнем месте, но могут появляться и новые пятна. Высыпания могут возникать в период от 30 минут до 8 часов после контакта с аллергеном.

2.2. Респираторная сенсибилизация.

2.2.1. Механизм действия.

2.2.1.1. Точный механизм действия веществ, которые вызывают сенсибилизацию дыхательных путей, неизвестен. Сенсибилизирующее вещество может вызывать респираторную сенсибилизацию при любом пути поступления в организм.

2.2.1.2. Одна из гипотез развития респираторной сенсибилизации заключается в формировании иммунного ответа Th2-типа, который характеризуется выработкой цитокинов (IL-4 и IL-5) и IgE-антител. Упрощенная схема развития респираторной сенсибилизации представлена на рис. 2.2.

Рис. 2.2. Упрощенный механизм респираторной сенсибилизации

2.2.1.3. Отсутствие IgE-антител соответствующей специфичности в сыворотке крови организма, подвергшегося воздействию химического вещества, не является однозначным показателем отсутствия респираторного сенсибилизирующего действия, что обусловлено техническими трудностями при точном измерении гаптен-специфических IgE-антител или наличием другого механизма, приводящего к респираторной сенсибилизации, который не зависит от IgE.

2.2.1.4. В настоящее время разрабатывается AOP по респираторной сенсибилизации для веществ с низким молекулярным весом. Предлагаемыми ключевыми событиями для сенсибилизации органов дыхания являются:

- ковалентное связывание веществ с белками (предполагается, что респираторные сенсибилизаторы обладают большей избирательностью в отношении реактивности к лизину, чем к цистеину, в то время как кожные сенсибилизаторы связываются как с цистеином, так и с лизином) (ключевое событие 1);

- сигналы клеточной опасности (активация воспалительных цитокинов и хемокинов, а также генных путей цитопротекции (Th2) (ключевое событие 2);

- активация и миграция дендритных клеток (смещение Th2) (ключевое событие 3);

- активация и пролиферация T-клеток (Th2-лимфоцитов) (ключевое событие 4);

- неблагоприятный эффект на организменном уровне (ключевое событие 5).

2.2.2. Клинические проявления.

2.2.2.1. Аллергические реакции при респираторной сенсибилизации могут варьироваться в зависимости от места локализации процесса: аллергический ринит (орган-мишень - слизистая оболочка полости носа), аллергическая бронхиальная астма (орган-мишень - бронхи), аллергический пневмонит (альвеолит) (орган-мишень - ткань легкого или альвеолы), при респираторной сенсибилизации может также проявляться иммунологическая контактная крапивница.

2.2.2.2. Аллергический ринит.

Проявляется заложенностью (обструкция) носа, выделениями из носа (ринорея), чиханием, зудом в полости носа, в некоторых случаях сопровождается конъюнктивитом.

2.2.2.3. Аллергическая бронхиальная астма.

Проявляется одышкой, характеризующейся затруднением выдоха, свистящими хрипами в области груди, кашлем, который может сопровождаться выделением слизистой мокроты, чувством сдавленности и заложенности в грудной клетке (бронхоспазмом).

2.2.2.4. Аллергический пневмонит (альвеолит).

Характеризуется инспираторной одышкой, кашлем, болью в грудной клетке, при остром течении - гриппоподобным состоянием.

2.3. Оценка и определение класса опасности сенсибилизаторов осуществляется в соответствии с настоящими МР.

2.4. Определение класса опасности химических веществ производится в зависимости от степени опасности химических веществ, в соответствии с СГС.

2.5. Определение класса опасности состоит из 3 этапов:

- определение соответствующих данных об опасных свойствах вещества;

- их последующий анализ в целях оценки опасности;

- решение о целесообразности присвоения класса опасности для данного вещества;

- установление степени опасности путем сопоставления полученных данных с согласованными критериями классификации опасностей (СГС).

2.6. Отнесение химических веществ к определенному классу опасности производится путем сопоставления имеющихся данных с согласованными критериями классификации опасности в соответствии с методическими документами <10>.

--------------------------------

<10> МР 1.2.0275-22 "Классификация токсичности и опасности химических веществ и смесей в соответствии с Согласованной на глобальном уровне системой классификации и маркировки (СГС)", утвержденные руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации 15.02.2022.

2.7. При анализе и оценке опасности химических веществ по сенсибилизирующему действию рекомендуется руководствоваться перечнем химических веществ, представленным в приложении 2 к настоящим МР.

2.8. Отсутствие химического вещества в представленном перечне не является основанием для однозначного исключения наличия у него сенсибилизирующего эффекта.

2.9. У лиц с повышенной чувствительностью к аллергенам на основе индивидуальной реакции возможно появление клинических симптомов сенсибилизации при воздействии химического вещества, не классифицированного как кожный или респираторный сенсибилизатор.

2.10. Определение класса опасности химических веществ, оказывающих сенсибилизирующее действие, рекомендуется в соответствии с главами III и IV.