IX. Определение зараженности семян грибами

125. Для определения зараженности семян грибами проводится фитопатологический анализ биологическим методом и (или) макроскопическим методом и (или) методом центрифугирования.

126. Биологический метод предназначен для установления внешней и внутренней зараженности семян на питательной среде или во влажной камере.

Внутренняя зараженность определяется у семян абрикоса, вишни, дуба, миндаля, ореха, персика, сливы, черешни, черемухи. Внешняя зараженность определяется у семян всех других видов лесных растений.

Во влажной камере определяется зараженность семян всех видов вишни, ильмовых, клена, миндаля, персика, сливы, черешни, черемухи, ясеня.

На питательных средах определяется зараженность всех других видов лесных растений.

127. Перед отбором семян для фитопатологического анализа используемые инструменты протираются спиртом, а бюксы и бумажные пакеты стерилизуются в течение 1 часа при температуре 130 °C в сушильном шкафу.

128. Для определения внешней зараженности из разных мест пробы отбираются: не менее 200 семян бука, каштана, лещины, фисташки, кедрового стланика, сосны кедровой корейской, сосны кедровой сибирской.

Для определения внутренней зараженности из разных мест пробы отбираются не менее 200 семян, из них выделяются 100 семян.

129. Остатки семян, выделенных из пробы, хранятся в течение 1 месяца на случай повторения анализа.

130. Для определения зараженности грибами семян на питательной среде используют кислый картофельный агар, среду Чапека, агаризированное пивное сусло, древесную среду.

131. Перед фитопатологическим анализом чашки Петри, пипетки, кружочки из фильтровальной бумаги стерилизуются в течение 1 часа при температуре 130 °C в сушильном шкафу. Боксы перед разливом среды и раскладкой семян дезинфицируются бактерицидными лампами, а термостаты перед загрузкой обрабатываются спиртом.

Вода стерилизуется в автоклаве под давлением 1,0 Па (кг/см²) в течение 30 минут или под давлением 1,5 Па (кг/см²) в течение 20 минут или кипятится в колбах, закрытых ватными пробками, в течение 30 минут с момента закипания.

132. Разлив питательной среды в чашки Петри и раскладка семян производится в специальном боксе. Толщина слоя среды в чашке Петри должна быть 3 - 4 мм. Семена раскладываются на застывшую питательную среду.

133. В чашку Петри раскладываются по 50 семян сосны, ели, шелковицы, спиреи, жимолости, бузины и других, близких к ним по размерам, или по 25 крупных семян пихты, караганы, яблони, груши и других, близких к ним по размерам, и по 5 - 10 семян клена, ореха и других, близких к ним по размерам семян.

134. Раскладка семян производится пинцетом или при помощи счетчика-раскладчика. Рабочая поверхность насадки счетчика-раскладчика и пинцет периодически дезинфицируется спиртом.

135. На чашках Петри проставляется номер пробы и дата раскладки семян.

136. Чашки Петри с разложенными семенами заворачиваются в крафт-бумагу, простерилизованную в паровом стерилизаторе (автоклаве), и помещаются на 5 - 6 суток в термостат с постоянной температурой 25 - 28 °C.

137. Просмотр семян производится на седьмые сутки.

При просмотре семян необходимо надевать респираторы или медицинские маски.

138. Сапрофитные грибы родов Aspergillus, Mucor, Penicillium, Rhisopus, Trichoderma, Hormiscium, Spicaria, Monosporium, Oedocephalum, Cladosporium, Monilia, Trichothecium, Cylidrocephalum, Helmintosporium, Cephalosporium, Stemphylium, Pullularia, Chaetomium, Sordaria, Pilobolus, Gliocladium, Thamnidium, Stysanus, Chaetostylum, Chaetocladiu определяются визуально по форме и цвету колоний, а также по цвету их обратной стороны.

Сапрофитные грибы других родов определяются сначала визуально по явно выраженным колониям, затем под микроскопом с малым увеличением.

Паразитные грибы родов Alternaria, Fusarium, Verticillium, Phomopsis, Botrytis, Pythium de Baryanum, Rhizoctonia определяются только под микроскопом.

При сомнении в правильности определения грибов небольшая часть развившейся колонии исследуется в капле воды или 0,01% уксусной кислоты под микроскопом при малом и большом увеличениях. Если споры грибов не обнаружены, то после определения других грибов чашки Петри оставляются на свету еще на 1 - 2 суток, затем колонии просматриваются под микроскопом.

139. При просмотре каждой чашки Петри производится учет зараженности семян отдельно каждым паразитным и сапрофитным грибом. Учету подлежат все колонии грибов, образовавшиеся на семенах и вокруг них.

Колонии паразитных грибов учитываются отдельно по каждому роду гриба в процентах от количества разложенных семян. Вычисления производятся до целого числа.

Оценивается зараженность семян каждым сапрофитным грибом по степени встречаемости:

единичная - меньше 5% зараженных семян;

слабая - от 5% и меньше 25% зараженных семян;

средняя - от 25% и меньше 50% зараженных семян;

сильная - от 50% и более зараженных семян.

140. Для определения зараженности семян применяется влажная камера.

Во влажной камере в чашки Петри по размеру дна чашки укладываются по два-три кружка фильтровальной бумаги с последующей стерилизацией их в паровом стерилизаторе (автоклаве) под давлением 1,0 Па (кг/см²) в течение 30 минут или под давлением 1,5 Па (кг/см²) в течение 20 минут или в сушильном шкафу в течение 1 часа при 130 °C.

После стерилизации фильтровальная бумага в чашках Петри увлажняется стерилизованной или свежекипяченой водой до полной влагоемкости, слегка приоткрывая при этом с одного края крышку чашки.

Увлажнение считается нормальным, если при наклоне чашки с кружков стекают мелкие капли воды.

Перед раскладкой обеззараживают поверхность семян путем быстрого проведения через пламя спиртовки или путем опускания в спирт на 1 минуту или путем стерилизации 0,5% раствором марганцевокислого калия в течение 1 часа с последующим промыванием стерилизованной или свежекипяченой водой.

141. Обеззараженные семена пинцетом раскладываются во влажную камеру.

142. Дальнейший анализ проводится в соответствии с пунктами 137 - 139 настоящего Порядка.

143. Макроскопический метод применяется для определения внешних изменений, вызванных развивающимися грибами в семенах всех видов березы, ольхи, дуба, тополя, ели и караганы древовидной.

У семян всех видов березы и ольхи зараженность грибами другими методами не определяется.

144. Анализ зараженности семян проводится одновременно с определением чистоты семян.

145. Навеска семян осматривается визуально без приборов или с помощью лупы. Из навески выделяются деформированные семена, а также семена со склероциями и с явно выраженным спороношением.

146. Признаки зараженности семян указаны в приложении N 8 к настоящему Порядку.

147. Зараженность семян всех видов березы, ольхи, караганы древовидной, дуба и тополя учитывается в процентах от массы навески.