4.3. Лабораторная диагностика кори, краснухи и эпидемического паротита

4.3.1. Лабораторное обследование с целью верификации диагноза кори, краснухи и эпидемического паротита проводится на основании анализа сыворотки крови. Возможно использование плазмы крови, если это указано в инструкции производителя тест-системы для постановки ИФА. Для проведения анализа не следует использовать гемолизированные, мутные, а также ксантохромные образцы (желтого цвета).

В случае получения непригодной для исследования сыворотки рекомендуется повторное взятие крови. Кровь берется натощак из вены в объеме 3 - 4 мл в стерильную пробирку - сухую или вакуумную пробирку с разделительным гелем. Пробу крови отстаивают при комнатной температуре в течение 30 минут или помещают в термостат при температуре 37 °C на 15 мин. Затем проводится центрифугирование в течение 15 мин при 3000 об/мин. По окончании центрифугирования сыворотку переносят в отдельную пробирку (например, типа "Эппендорф"). Образцы сывороток крови хранятся при комнатной температуре плюс 18 - 25 °C в течение 6 ч, при температуре плюс 2 - 8 °C - в течение суток. Для более длительного хранения образцы необходимо разделить на аликвоты и заморозить при температуре не выше минус 16 °C. Многократное замораживание/размораживание сыворотки (плазмы) крови недопустимо. Пробирка с биологическим материалом визуально проверяется на герметичность и маркируется в соответствии с прилагаемым направлением (приложение 6 к настоящим МУ). При транспортировании внутри одного здания пробирки с биологическим материалом помещают в штативы и специальные герметичные контейнеры-переноски. Транспортирование производится при комнатной температуре в течение 15 мин или при температуре плюс 2 - 8 °C. Образцы от каждого пациента помещают в индивидуальный герметичный пакет и дополнительно упаковывают в общий герметичный пакет (zip-lock) подходящего размера с адсорбирующим материалом в количестве, достаточном для адсорбции всего образца в случае его утечки. Пакет герметично закрывают. Полиэтиленовый пакет помещают в термоизолирующий контейнер (сумку-холодильник), приспособленный для транспортирования биологических материалов, и транспортируют при температуре плюс 2 - 8 °C в вирусологическую лабораторию РЦ в течение 72 ч.

Тестирование образцов сыворотки методом ИФА проводят с использованием разрешенных к применению и зарегистрированных на территории Российской Федерации в установленном порядке <24> реагентов по определению специфических антител. Постановка ИФА осуществляется в соответствии с инструкцией производителя диагностического набора.

--------------------------------

<24> Часть 4 статьи 38 Федерального закона от 21.11.2011 N 323-ФЗ "Об основах охраны здоровья граждан в Российской Федерации"; постановление Правительства Российской Федерации от 27.12.2012 N 1416 "Об утверждении Правил государственной регистрации медицинских изделий".

С учетом чувствительности тест-систем, используемых для определения специфических антител (маркеров инфекции), оптимальными сроками получения сыворотки крови для диагностики методом ИФА являются 4 - 5 день при кори, 6 - 7 день при краснухе с момента появления сыпи (1-я сыворотка), как можно раньше в остром периоде заболевания при эпидемическом паротите. Второй образец сыворотки должен быть получен при проведении активного эпидемиологического надзора, дифференциальной диагностики стертых и атипичных формах заболевания не ранее 14 дня после взятия первой пробы (2-я сыворотка). Исследование парных сывороток следует проводить параллельно в одной постановке. Оценка результатов исследования проводится в соответствии с инструкцией по применению используемой тест-системы.

Тактика серологического обследования пациентов с подозрением на корь, краснуху, эпидемический паротит проводится с учетом закономерностей формирования иммунного ответа у больных этими инфекциями. В целом исследования могут проводится при кори - с 4 по 28 день, при краснухе - с 6 по 30 день со дня появления сыпи [1]. Низкоавидные IgG определяются в сыворотке крови с 6 - 7 дня появления сыпи и определяются в течение 2 - 3 месяцев со дня заболевания при первичном иммунном ответе; постинфекционные IgG с высокой степенью авидности циркулируют практически на протяжении всей жизни [1].

Молекулярно-генетические методы исследований (например, ОТ-ПЦР, LAMP) могут применяться с целью дифференциальной диагностики.

4.3.2. Критериями лабораторного подтверждения диагноза у больного с подозрением на корь, краснуху, эпидемический паротит являются:

- положительный результат на IgM;

- 4-х и более кратное нарастание титров IgG во втором образце сыворотки, полученном не ранее 14 дня после взятия первой пробы;

- низкая степень авидности IgG.