Безопасная техника выполнения посевов

4.1. Посев микроорганизмов (материала, содержащего ПБА) в пробирки, флаконы, колбы, чашки Петри осуществляется бактериологической петлей, пипеткой, стеклянной палочкой или шпателем многоразового применения, предварительно обожженными в пламени спиртовки (горелки) или в инфракрасных стерилизаторах микробиологических петель, а также аналогичными стерильными инструментами однократного применения.

4.2. Материал извлекается из емкости или вносится в емкость для посева, не касаясь горлышка (краев) и стенок емкостей.

4.3. При применении бактериологической петли многоразового пользования рекомендуется, чтобы ее конец был плотно замкнут в кольцо. При посеве жидкого материала кольцо заполняется посевным материалом, чтобы образовалась жидкостная пленка.

4.4. Перед началом работы пробки (крышки) в пробирках, флаконах и иных емкостях для удобства дальнейшего извлечения (снятия) ослабляются, но не открываются.

4.5. Емкость берется рукой в средней трети так, чтобы не закрыть надпись и содержимое, а также не обжечь руку при обжиге горлышка. Другой рукой берется бактериологическая петля или пипетка, мизинцем и безымянным пальцем захватывается верхняя часть пробки пробирки (флакона, колбы), прижимается к ладони и вынимается из емкости. Горлышко емкости, из которой забирается посевной материал, обжигается в пламени спиртовки (горелки).

4.6. Перед набором материала горячая петля остужается прикосновением о внутреннюю стенку пробирки, флакона, колбы.

4.7. После отбора материала петля или пипетка извлекается из емкости, горлышко емкости обжигается над пламенем спиртовки (горелки) или в инфракрасных стерилизаторах микробиологических петель, закрывается пробкой и отставляется в сторону (помещается в штатив). При этом рука с петлей или пипеткой и содержащимся в них материалом неподвижно фиксируется над салфеткой, смоченной дезинфицирующим раствором, или емкостью с дезинфицирующим раствором.

Далее берется емкость, в которую будет осуществляться посев материала, проверяется соответствие надписи. Емкость подносится к руке с петлей или пипеткой и открывается, как описано выше. Материал оставляется в питательной среде, петля или пипетка извлекается из емкости, горлышко емкости обжигается и закрывается пробкой, емкость отставляется в сторону (помещается в штатив).

4.8. Пипетка погружается в дезинфицирующий раствор. Предварительно раствором заполняется полость пипетки (сначала погружается носик, дезинфицирующий раствор набирается в пипетку так, чтобы не замочить фильтр пипетки), после этого отсоединяется дозирующее устройство.

4.9. Петля после посева обеззараживается в пламени горелки. Чтобы избежать разбрызгивания заразного материала петля вводится в пламя, начиная с петледержателя, и медленно перемещается, прокаливаясь докрасна, по плечу петли к кольцу с остатками материала. Кольцо петли вносится в пламя для полного сжигания материала только после его подсушивания и надежной фиксации на петле. Обжиг контролируется для предотвращения образования аэрозоля (брызг) или падения с петли кусочков материала на лабораторный стол (столешницу БМБ).

4.10. Одноразовые микробиологические петли из пластика после использования помещаются в емкость с дезинфицирующим раствором. Дальнейшее обращение с одноразовыми микробиологическими петлями осуществляется в соответствии с санитарно-эпидемиологическими требованиями <24>.

--------------------------------

<24> Глава X СанПиН 2.1.3684-21 "Санитарно-эпидемиологические требования к содержанию территорий городских и сельских поселений, к водным объектам, питьевой воде и питьевому водоснабжению, атмосферному воздуху, почвам, жилым помещениям, эксплуатации производственных, общественных помещений, организации и проведению санитарно-противоэпидемических (профилактических) мероприятий", утвержденных постановлением Главного государственного санитарного врача Российской Федерации от 28.01.2021 N 3 (зарегистрировано Минюстом России 29.01.2021, регистрационный N 62297), с изменениями, внесенными постановлениями Главного государственного санитарного врача Российской Федерации от 26.06.2021 N 16 (зарегистрировано Минюстом России 07.07.2021, регистрационный N 64146), от 14.12.2021 N 37 (зарегистрировано Минюстом России 30.12.2021, регистрационный N 66692), от 14.02.2022 N 6 (зарегистрировано Минюстом России 17.02.2022, регистрационный N 67331) (далее - СанПиН 2.1.3684-21).

4.11. Чашки Петри с питательной средой засеваются аналогично, не касаясь краев крышки и чашки. Чашки с агаром, приготовленные для посевов, предварительно подсушиваются с целью предотвращения образования конденсата в процессе инкубирования.

Перед набором материала горячая петля остужается прикосновением о внутреннюю поверхность крышки чашки Петри или питательной среды, свободной от клеток микроорганизмов. Чашка Петри берется с поверхности стола первыми фалангами пальцев левой руки, переворачивается, чтобы дно опустилось в ладонь. Крышка приоткрывается и фиксируется большим, указательным и средним пальцами так, чтобы бактериологическая петля свободно, не задевая края чашки и крышки, проходила к агаровой пластинке (целиком чашку Петри открывать не рекомендуется). Во время посева петля двигается плавно, без нажима, не царапая поверхность агара, не доходя до стенок чашки. По завершении чашка Петри закрывается, переворачивается донышком вверх, помещается на поверхность стола (столешницы БМБ) или в специальный переносной контейнер для чашек Петри.

4.12. Если для посева используются стеклянные палочки, шпатели, то соблюдаются те же меры предосторожности и приемы работы, что и при посеве бактериологической петлей. Культура микроорганизма или исследуемый материал пипеткой наносится в центр чашки Петри (разбрызгивание не допускается), затем стерильным шпателем равномерно, не касаясь бортиков, распределяется по поверхности питательной среды в чашке Петри. Чашка Петри переворачивается крышкой вниз после полного впитывания посевного материала в питательную среду.

4.13. Пересев проросших мицелиальных грибов осуществляется подобно пересеву бактериальной культуры, но имеет следующие особенности. При пересеве из пробирки со скошенным агаром в пробирку (чашку Петри) с твердой питательной средой боковая часть верхушки агара ("косяка") с культурой гриба аккуратно вырезается микологической лопаткой. Затем плавными движениями по стеклу (от себя) поддевается вырезанный фрагмент, с возможностью не задеть конидиеносцы со спорами. Культура переносится в пробирку (чашку) и слегка вдавливается в агар. В случае использования микологического крюка проводятся аналогичные манипуляции по взятию культуры - культура переносится в пробирку двумя уколами в агар (один - в толщу агара, второй - ближе к поверхности) или на чашку и слегка вдавливается в агар.

При пересеве из пробирки со скошенным агаром в пробирку с жидкой питательной средой, забор культуры осуществляется, как описано выше. Культура переносится в пробирку микологической лопаткой (крюком), погружается в питательную среду и аккуратно распределяется по всему объему среды.

При пересеве с жидкой питательной среды на жидкую питательную среду, с пленки на поверхности осторожно снимается кусочек мицелия или конидиеносцы микологической лопаткой (крюком), переносится в пробирку, погружается микологической лопаткой (крюком) в питательную среду, и культура аккуратно распределяется по всему объему среды.

При пересеве с чашки на чашку, микологической лопаткой (крюком) аккуратно делаются прорези в агаре в виде пересекающихся линий, образующих равнобедренный треугольник. Затем медленно поддевается фрагмент культуры с тонким слоем агара (при этом агар прорезается в горизонтальной плоскости) и переносится на твердую питательную среду чашки (пробирки), немного вдавливается в агар.

По завершении чашка закрывается и не переворачивается.