Безопасная техника приготовления мазков

4.14. Для приготовления мазков культур микроорганизмов, крови, мокроты, мазков-отпечатков органов животных и аутопсийного материала используются предварительно отмытые и обезжиренные предметные стекла со шлифованным краем. При приготовлении мазков лабораторный стол (столешница БМБ) дополнительно оборудуется: емкостями для фиксации и промывания мазков; емкостью с 95% этиловым спиртом, ножницами и анатомическим пинцетом; специальным лотком (контейнером), на котором располагается штатив-рельсы для предметных стекол; штативом для сушки мазков.

4.15. Предметное стекло маркируется простым карандашом на шлифованной поверхности, помещается на штатив-рельсы, закрепленный над специальным лотком (контейнером) или на крышку чашки Петри. На одном стекле допускается приготовление нескольких мазков. На стекло бактериологической петлей наносится капля микробной взвеси и плавными круговыми движениями без отрыва петли от поверхности стекла, чтобы не допустить разбрызгивания материала, распределяется по стеклу, не доводя до его края. Если мазок выполняется из культуры бактерий, выращенной на плотной питательной среде, то на стекло предварительно наносится петлей капля 0,9% раствора натрия хлорида и рядом с ней петлей наносится культура. Капли не рекомендуется располагать близко к краям стекла во избежание загрязнения его ребер. Медленно, плавными круговыми движениями без отрыва петли от поверхности стекла, культура сначала растирается на стекле, а затем соединяется с каплей и перемешивается. Не допускается постукивание петлей о стекло.

Для приготовления мазка из крови на предметное стекло, ближе к одному из его концов, наносится капля крови. Второе - шлифованное - стекло, которое уже предметного или с обрезанными углами, ставится на первое под углом 45° и подводится к капле крови до соприкосновения с ней. После того как кровь растечется по шлифованному краю, стеклом делается скользящее движение для ее равномерного распределения тонким слоем по всей поверхности стекла. Толщина мазка зависит от величины угла между стеклами: чем острее угол, тем тоньше мазок.

Мазок из мокроты делается петлей. Если мокрота густая, то кусочек ее вносится в каплю 0,9% раствора натрия хлорида и растирается, как описано выше.

Мазок подсушивается на воздухе, затем с помощью пинцета предметное стекло помещается в контейнер с фиксирующей жидкостью (фиксатором), которой покрывается все стекло.

4.16. Для фиксации мазков используется 95% этиловый спирт, смесь Никифорова (равное количество этилового спирта и диэтилового эфира), а при исследовании материала, содержащего или подозрительного на содержание возбудителя сибирской язвы или ПБА "неизвестной" этиологии, - 95% этилового спирта с добавлением перекиси водорода до конечной концентрации в растворе 3%. Время фиксации 30 минут. При погружении нескольких стекол с мазками время фиксации отсчитывается после погружения последнего стекла.

Фиксация мазков в пламени спиртовки (газовой горелки) допускается только при работе с ПБА III - IV групп.

Фиксированный мазок не является обеззараженным. Работа с фиксированными мазками как с обеззараженным материалом допускается после получения положительных результатов на специфическую стерильность.

4.17. После экспозиции стекло пинцетом извлекается из фиксатора и высушивается на воздухе, или остатки спирта сжигаются (не обжигаются мазки, предназначенные для окраски флуоресцирующими иммуноглобулинами).

Пинцет прожигается в пламени горелки (спиртовки). Штатив-рельсы, специальный лоток, на которых лежало предметное стекло, спиртовка (горелка), протираются тампоном, смоченным дезинфицирующим раствором.

4.18. Мазки из органов умерщвленных или павших животных (готовятся в блоке для работы с инфицированными животными), аутопсийного материала выполняются методом отпечатков, касаясь кусочком органа поверхности предметного стекла. Кусочек органа вырезается ножницами, предварительно смоченными в 95% этиловом спирте и обожженными в пламени горелки, после их остывания. Не рекомендуется делать "густой" отпечаток и наносить мазок близко к краям предметного стекла. Для получения тонких мазков-отпечатков срезанные поверхности кусочков органов просушиваются прикосновением к стерильной фильтровальной бумаге, после чего делаются отпечатки на стекле. Использованная фильтровальная бумага обеззараживается. Вместо просушивания можно сделать 2 - 3 отпечатка одним и тем же органом на одном стекле. Далее работа с мазком проводится в соответствии с п. п. 4.17, 4.18.

Время начала фиксации мазков-отпечатков отсчитывается от времени погружения последнего мазка или от времени выхода из блока для работы с инфицированными животными.

4.19. Окрашивание мазков (препаратов) проводится в соответствии с установленными методиками окрашивания с соблюдением следующих мер:

- все этапы окраски, включая промывание водой, осуществляются над емкостью с дезинфицирующим раствором;

- не допускается промывание мазков над раковиной для мытья рук.

Дезинфицирующий раствор, над которым окрашивались мазки с ПБА, рассматривается как жидкие отходы "заразной" зоны, которые подлежат соответствующей обработке <25>.

--------------------------------

<25> Приложение 2 СанПиН 3.3686-21.

4.20. При необходимости хранения фиксированный (фиксированный и окрашенный) мазок помещается в контейнер, промаркированный надписью "мазки фиксированные", который хранится в опечатанном сейфе (холодильнике) микробиологической комнаты.

4.21. После просмотра мазков под микроскопом иммерсионное масло удаляется с предметного стекла сухим тампоном, тампон помещается в емкость с дезинфицирующим раствором. Проводится текущая дезинфекция микроскопа. Тампоном, смоченным 70% раствором этилового спирта или иным эффективным дезинфицирующим средством, протираются в следующей последовательности: основание, рукоятки макрометрического и микрометрического винтов фокусирования, предметный столик микроскопа.

Предметное стекло обеззараживается в соответствии с санитарно-эпидемиологическими требованиями <26>.

--------------------------------

<26> Приложение 2 СанПиН 3.3686-21.