|
Метод
|
Назначение (цели и задачи)
|
Контрольные точки
|
Ограничения
|
|
Метод ОЭСР N 407 "Изучение пероральной токсичности при повторном воздействии в 28-дневных опытах на грызунах"
|
Метод предназначен для получения информации о возможном вреде для здоровья при повторном введении вещества в течение небольшого периода времени.
Выявляет общетоксическое действие, эффекты на нервную, иммунную и эндокринную системы (нарушение физиологии щитовидной железы), репродуктивные органы животных обоих полов
|
Критические точки для выявления эндокринных разрушителей:
- обязательные: масса органов (семенники, эпидидимисы, надпочечники, простата + семенные пузырьки с коагулирующими железами) и гистопатология (гонады, семенники и яичники, эпидидимисы, простата + семенные пузырьки с коагулирующими железами, матка, включая шейку матки, надпочечники, щитовидная железа, вагина);
- необязательные: масса органов (яичники, матка, включая шейку матки, щитовидная железа);
- измерения уровней гормонов (трийодтиронин (далее - Т3), тироксин (далее - Т4), тиреотропный гормон (далее - ТТГ) в крови)
|
Чувствительность испытания не достаточна для выявления всех веществ с (анти)андрогенным или (анти)эстрогенным видом действия.
Метод не распространяется на стадии жизненного цикла организма, уязвимых для воздействия эндокринных разрушителей.
Не выявляет эндокринную активность у веществ, слабовзаимодействующих с эстрогеновыми и андрогеновыми рецепторами.
Исследование не характеризуется как скрининговое для оценки эндокринной активности (неспецифичное исследование)
|
|
Метод ОЭСР N 408 "Изучение пероральной токсичности при повторном воздействии в 90-дневных опытах на грызунах"
|
Метод предназначен для получения информации о возможном вреде для здоровья при повторном пероральном введении в течение длительного периода времени, включая период после прекращения материнского вскармливания, рост и взросление. Выявляет общетоксическое действие, органы-мишени, способность вещества к кумуляции, эффекты на иммунную и репродуктивную системы.
Особое внимание уделяет нейрологическим показателям.
Позволяет установить уровни, при которых не наблюдаются неблагоприятные эффекты вещества (NOAEL)
|
Критические точки для выявления эндокринных разрушителей:
- массы органов и гистопатология: (гипофиз, щитовидная железа, паращитовидные железы, тимус (вилочковая железа), поджелудочная железа, надпочечники, гонады, матка, вспомогательные половые органы, молочные железы самок, простата)
|
Необходима первичная информация о токсичности вещества в условиях острого и 28-дневного тестов
|
|
Метод ОЭСР N 409 "Изучение пероральной токсичности при повторном воздействии в 90-дневных опытах на негрызунах"
|
Метод предназначен для получения информации о возможном вреде для здоровья при повторном введении вещества в течение длительного периода времени.
Выявляет общетоксическое действие, органы-мишени, способность вещества к кумуляции.
Позволяет установить NOAEL
|
Критические точки для выявления эндокринных разрушителей: массы органов и гистопатология (гипофиз, щитовидная и паращитовидные железы, тимус (вилочковая железа), поджелудочная железа, надпочечники, гонады, матка, вспомогательные половые органы, молочные железы самок, простата)
|
Вспомогательный (уточняющий) метод, необходимо обоснование исследования на негрызунах
|
|
Метод ОЭСР N 412 "Оценка подострой токсичности при ингаляционном поступлении в 28-дневном исследовании"
|
Метод предназначен для оценки токсичности вещества при многократном ингаляционном воздействии в течение ограниченного периода времени.
Позволяет провести количественную оценку ингаляционного риска, выбрать концентраций для долгосрочных исследований
|
Критические точки для выявления эндокринных разрушителей: гистопатология (надпочечники, матка, включая шейку, яичники, семенники, семенные пузырьки, вилочковая и щитовидная железы)
|
Метод не распространяется на стадии жизненного цикла организма, уязвимых для воздействия эндокринных разрушителей.
Исследование не характеризуется как скрининговое для оценки эндокринной активности (неспецифичное исследование)
|
|
Метод ОЭСР N 413 "Оценка субхронической токсичности при ингаляционном поступлении в 90-дневном исследовании"
|
Метод предназначен для оценки токсичности вещества при многократном ингаляционном воздействии в течение ограниченного периода времени.
Позволяет провести количественную оценку ингаляционного риска, выбрать концентраций для хронических исследований
Метод применяется при обосновании величины гигиенического норматива вещества в воздухе рабочей зоны
|
Критические точки для выявления эндокринных разрушителей:
- гистопатология (надпочечники, яички, придатки яичка, семенные пузырьки коагулирующие (свертывающие) железы, предстательная железа, молочная железа (самца и самки), матка, влагалище (вагина), яичники, поджелудочная железа, щитовидная и паращитовидная железы, гипофиз, тимус (вилочковая железа)
|
Необходима первичная информация о токсичности вещества в условиях острого и 28-дневного тестов
|
|
Метод ОЭСР N 414 "Оценка токсического действия на пренатальное развитие"
|
Метод предназначен для получения общей информации о влиянии повторного перорального воздействия вещества в период беременности.
Включает в себя изучение воздействия на материнский организм, а также гибели, структурных аномалий или изменений в развитии плода.
Позволяет выявить специфическое воздействие на развивающееся потомство (тератогенное действие).
|
Определение параметров NOAEL по материнской токсичности и воздействию на развивающееся потомство (тератогенному действию). Критические точки для выявления эндокринных разрушителей:
- масса органов и гистопатология (щитовидная железа у материнских особей);
- измерения уровней гормонов (Т3, Т4, ТТГ в крови) у материнских особей;
- определение аногенитального расстояния у плодов обоих полов;
- неполное опущение (крипторхизм) яичка у плодов
|
Необходима комплексная оценка полученных результатов в совокупности с результатами исследования субхронической токсичности, репродуктивной токсичности, токсикокинетических и других исследований
|
|
Метод ОЭСР N 416 "Исследование репродуктивной токсичности на двух поколениях"
|
Метод предназначен для получения информации о влиянии на целостность и состояние мужской и женской репродуктивных систем, в том числе на функцию гонад, эстральный цикл, поведение во время спаривания, зачатие, беременность, роды, лактацию и отлучение от материнского питания, а также рост и развитие потомства.
Метод позволяет дать предварительную оценку токсического действия исследуемых веществ на эмбриональное и постэмбриональное развитие, а также на такие показатели, как неонатальные заболевания, смертность, поведение и тератогенез, и служит руководством для последующих исследований
|
Определение NOAEL.
Критические точки для выявления эндокринных разрушителей:
- параметры сперматогенеза (например, масса яичек и придатков яичек, подвижность и морфология сперматозоидов)
- гистопатология родительских животных (P и F1) (влагалище, матка с шейкой матки и яичниками, яичко, придаток яичка, семенные пузырьки, простата и других органов-мишеней)
|
Экстраполяция результатов исследования на человека носит ограниченный характер.
|
|
Метод ОЭСР N 421 "Оценка репродуктивной/эмбриональной токсичности скрининговым методом"
|
Метод предназначен для оценки репродуктивной (эмбриональной) токсичности, связанной с введением повторяющихся доз.
Получение данных, касающихся воздействия исследуемого вещества на мужскую и женскую репродуктивную способность, на функцию половых желез, поведение при спаривании, оплодотворение, развитие оплодотворенного яйца и роды
|
Наименьший уровень наблюдаемого вредного воздействия (NOAEL). Критические точки для выявления эндокринных разрушителей:
- констатация бесплодия;
- прижизненные наблюдения (эстральный цикл, уровень гормонов щитовидной железы у родительских особей и потомства);
- гистопатология (яичники, яички и придатки яичек).
Все остальные сохраненные органы (в том числе щитовидная железа родительских особей и потомства) изучаются по необходимости
|
Не обеспечивает полноту данных по всем аспектам репродуктивности и эмбрионального развития. Скрининговое исследование, не обеспечивает доказательств отсутствия репротоксического действия.
Не дает достаточных доказательств, что вещество нарушает работу эндокринной системы
|
|
Метод ОЭСР N 422 "Совместное исследование токсичности при повторном воздействии с репродуктивной/эмбриональной токсичностью (скрининговый метод)"
|
Метод предназначен для определения репродуктивной (эмбриональной) токсичности; получение предварительной информации о влиянии вещества на мужскую и женскую репродуктивную способность, включая функцию половых желез, брачное поведение, зачатие, развитие эмбриона и роды, либо для оценки токсических свойств веществ на ранней стадии.
Позволяет выявить различия между репродуктивными (эмбриональными) эффектами при отсутствии общей токсичности и на уровнях воздействия, токсичных для взрослых особей. Выявляет эффекты на нервную и иммунную системы
|
Определение NOAEL, LOAEL. Критические точки для выявления эндокринных разрушителей:
- массы органов (яички и придатки яичек, тимус (вилочковая железа), надпочечники);
- гистопатология (яичники, яички и придатки яичек, надпочечники, тимус (вилочковая железа), щитовидная железа, матка)
|
Скрининговое исследование, не обеспечивает однозначного доказательства специфичности репротоксического действия
|
|
Метод ОЭСР N 440 "Утеротропный биотест на грызунах: краткосрочный скрининг-тест для выявления эстрогенной активности
|
Метод предназначен для получения информации об эстрогенной активности in vivo.
Основан на определении увеличения массы матки (утеротропной активности). Тест оценивает способность химического вещества вызывать биоэффекты в соответствии с действием агонистов или антагонистов естественных эстрогенов. Рекомендован для использования на животных, у которых гипоталамо-гипофизарно-яичниковая ось не функционирует, следствием чего является низкий эндогенный уровень циркулирующего эстрогена
|
Положительная реакция - статистическое увеличение массы матки животных (p < 0,05)
|
Утеротропное действие не всегда имеет полностью эстрогенное происхождение, поскольку может быть вызвано также химическими веществами, не являющимися агонистами или антагонистами эстрогенов
|
|
Метод ОЭСР N 441
"Тест Хешбергера на крысах: краткосрочное скрининговое исследование для выявления (анти)андрогенных свойств"
|
Метод предназначен для оценки способности вещества проявлять биологическую активность, соответствующую действию агонистов и антагонистов андрогенов или ингибиторов  , которые в некоторых тканях-мишенях андрогенов ингибируют преобразование тестостерона в дигидротестостерон
|
Изменение абсолютной массы пяти андроген-зависимых тканей кастрированных препубертатных самцов крысы:
- вентральная простата;
- семенные пузырьки вместе со свертывающей железой и содержащимися жидкостями;
- мышца, поднимающая задний проход + луковично-пещеристая мышца;
- парная бульбоуретральная железа (куперова железа);
- головка пениса
|
Необходима комплексная оценка полученных результатов в совокупности с результатами тестов in vitro (анализ связывания с андрогеновыми и эстрогеновыми рецепторами) и in vivo (тесты при многократном воздействии, тесты на репродуктивную токсичность)
|
|
Метод ОЭСР N 443 "Расширенное изучение репродуктивной токсичности на одном поколении"
|
Метод предназначен для оценки пре- и постнатальных эффектов химических веществ на развитие путем оценки системной токсичности для беременных и кормящих самок и молодого и взрослого потомства. Детальное исследование ключевых показателей развития (жизнеспособность потомства, неонатальное здоровье, статус развития
при рождении и физическое и функциональное развитие до взросления)
|
Выявление органов-мишеней. Определение NOAEL, LOAEL, других пороговых (реперных) показателей.
Критические точки для выявления эндокринных разрушителей:
- массы органов (матка, яичники, тимус (вилочковая железа), щитовидная и паращитовидная железы, гипофиз, надпочечники, вагина);
- гистопатология (семенники, эпидидимисы, простата + семенные пузырьки с коагулирующими железами, яичники, матка, включая шейку матки, вагина, надпочечники, щитовидная и вилочковая железы);
- измерения уровней гормонов (Т3, Т4, ТТГ в крови)
|
Предварительно проводятся скрининговые исследования (исследование утеротропного действия, тест Хершбергера)
|
|
Метод ОЭСР N 455 "Исследование транскрипционной активации, опосредованной стабильно трансфицированным человеческим  эстрогена, для выявления эстроген-агонистической активности веществ"
|
Выявление эстроген-агонистической активности веществ с помощью стабильно трансфицированного человеческого альфа-рецептора эстрогена  путем измерения хемилюминесценции.
Скрининговая оценка веществ, выбор приоритетных для дальнейших исследований
|
Определение параметров:
- RPCMax - максимальный уровень ответа, вызванный тестируемым веществом и выраженный как процент от ответа на 1 нМ E2 на том же самом планшете; а также PCMax - концентрация, при которой достигается RPCMax;
- PC10 и PC50 - концентрации исследуемого химического вещества, при которых реакции составляют 10% и 50% от реакции, вызванной положительным контролем (E2, 1 нм) в каждом планшете, соответственно
|
Результаты исследования не могут быть экстраполированы на передачу сигналов и регуляцию в интактной эндокринной системе in vivo.
Активация транскрипции, опосредованная эстрогеновым рецептором, является не одним механизмом действия эндокринных разрушителей.
Не выявляет антагонисты - для веществ с отрицательным результатом в данном тесте. Необходимы дополнительные исследования на связывание с эстрогеновым рецептором. Позволят оценить эстроген-агонистическую активность только исходного вещества, поскольку способности in vitro клеточных систем метаболизировать исходное вещество ограничены
|
|
Метод ОЭСР N 456 "H295R in vitro тест на стероидогенез"
|
Метод предназначен для идентификации ксенобиотиков, мишенями которых являются эндогенные компоненты внутриклеточных биохимических путей, обеспечивающих синтез E2 и (или) T из холестерина.
Качественный ответ ДА (НЕТ) относительно способности вещества индуцировать или ингибировать синтез E2 и T - прямая оценка воздействия вещества на жизнеспособность (цитотоксичность) клетки
|
Определение параметров:
- LOEC - минимальная концентрация наблюдаемого эффекта;
- NOEC - концентрация отсутствия эффекта;
- степень выраженности эффекта
|
Скрининговое исследование для выявления потенциальных эндокринных разрушителей.
Не предназначен для:
- идентификации веществ, влияющих на стероидогенез посредством воздействия на механизмы "гипоталамо-гипофизарно-гонадной" оси;
- получения информации о механизмах взаимодействия вещества с эндокринной системой
|
|
Метод ОЭСР N 458 "Анализ транскрипционной активации стабильно трансфицированного рецептора андрогена человека для определения андрогенной агонистической и антагонистической активности химических веществ"
|
Выявление трансактивации и ингибирования рецепторов андрогенов человека путем измерения активности люциферазы
|
Определение параметров:
1) log PC10 (для агонистов) - концентрации исследуемого химического вещества, при которой реакция составляет 10% от реакции, вызванной положительным контролем ( , 10 нМ) в каждом планшете
2) log IC30 (для антагонистов) - концентрации исследуемого химического вещества, при которой реакция составляет 30% от реакции, вызванной положительным контролем ( , 500 пМ) в каждом планшете
|
Метод направлен на трансактивацию и ингибирование андроген-регулируемого репортерного гена путем связывания с AR человека, и поэтому его не следует напрямую экстраполировать на комплекс in vitro андрогенной регуляции клеточных процессов. Позволяет оценить активность исходного вещества, поскольку способности in vitro клеточных систем метаболизировать исходное вещество ограничены
|