КОМПЛЕМЕНТ-ЗАВИСИМЫЙ ГЕМОЛИЗ

При выполнении методики 1 для измерения гемолиза к полученному образцу прибавляют 600 мкл предварительно нагретого до температуры 37 °C альбумин-барбиталового буферного раствора, тщательно ресуспендируют клетки путем пипетирования (не менее пяти раз) и помещают кювету в термостатированный держатель кювет спектрофотометра. Через 2 мин прибавляют 200 мкл разведенного комплемента морских свинок 125 - 200 CH₅₀/мл, двукратно пипетируют для перемешивания и сразу начинают регистрацию оптической плотности через установленные промежутки времени при длине волны 541 нм с использованием альбумин-барбиталового буферного раствора в качестве компенсационного раствора. Измерение прекращают при очевидном прохождении точки перегиба графика зависимости оптической плотности от времени.

При выполнении методики 2 для измерения степени гемолиза к полученному образцу прибавляют 900 мкл предварительно нагретого до температуры 37 °C альбумин-барбиталового буферного раствора, осторожно ресуспендируют клетки путем пипетирования (не менее пяти раз). Микропланшеты должны быть предварительно нагреты до температуры 37 °C. Переносят по 240 мкл каждой суспензии в 4 лунки микропланшета и инкубируют при температуре 37 °C в течение шести минут, осторожно встряхивая каждые 10 с. В каждую лунку микропланшета прибавляют по 60 мкл разведенного комплемента морских свинок 150 CH₅₀/мл, тщательно перемешивают в течение 10 с и начинают регистрацию оптической плотности при длине волны 541 нм при температуре 37 °C; измерение проводят каждые 20 с. Измерение прекращают при очевидном прохождении точки перегиба графика зависимости оптической плотности от времени.