Внимание! Изменения, внесенные Решением Коллегии ЕЭК от 25.06.2024 N 75, в части дополнения общими фармакопейными статьями, вводятся в действие с 1 января 2025 года.
Решение Коллегии Евразийской экономической комиссии от 11.08.2020 N 100 (ред. от 25.06.2024) "О Фармакопее Евразийского экономического союза"

3.2.2. Рандомизированная постановка с использованием трех доз (на примере биологической активности гонадотропина хорионического)

Если в качестве тест-объекта используют крыс-самок, то в качестве ответа животного принимают отношение массы матки в мг к массе тела в г. В случае использования самцов, ответ животного представляет собой отношение массы добавочных половых желез в мг к массе тела в г.

Для определения активности гонадотропина хорионического использовали 6 групп крыс-самок по 10 особей в каждой. Каждую дозу испытуемого образца и стандартного образца, вводили одной группе животных (соотношение доз 1:2).

В таблице 3.2.2.-5 даны ответы крыс-самок на введение трех доз стандартного образца и трех доз испытуемого образца.

Таблица 3.2.2.-5. - Относительная масса матки крыс (рандомизированная постановка с использованием трех доз на примере биологической активности гонадотропина хорионического)

Группа 1

Группа 2

Группа 3

Группа 4

Группа 5

Группа 6

s1

s2

s3

u1

u2

u3

0,398

1,583

2,233

0,533

1,655

3,447

0,443

0,780

2,129

0,663

0,935

3,123

0,483

2,380

2,872

0,434

1,973

3,354

0,623

0,984

2,732

0,71

2,199

1,769

0,462

1,265

3,043

0,637

0,886

4,382

0,619

1,568

2,717

0,47

1,097

3,525

0,436

1,167

2,939

0,65

2,447

3,331

0,495

1,743

1,785

0,600

1,941

3,995

0,568

1,375

3,474

0,820

1,151

2,977

0,593

1,375

3,120

0,512

2,804

2,556

Для того чтобы проверить статистическую значимость источников вариации, пригодность результатов и вычислить дисперсию опыта, проводят дисперсионный анализ полученных данных. При этом рассчитывают значения дисперсий для 8 источников (сводная таблица 3.2.2.-7).

Таблица 3.2.2.-6. - Суммы ответов и контрасты (рандомизированная постановка с использованием трех доз на примере биологической активности гонадотропина хорионического)

Стандартный образец Рисунок 1449

Испытуемый образец Рисунок 1450

Сумма

Малая доза

S1 = 5,12

U1 = 6,03

Средняя доза

S2 = 14,22

U2 = 17,09

Большая доза

S3 = 27,04

U3 = 32,46

Сумма

S = 46,38

U = 55,58

Рисунок 1451

Линейный контраст

LS = S3 - S1 = 21,92

LU = U3 - U1 = 26,43

Рисунок 1452

Квадратический контраст

Qs = S1 - 2S2 + S3 = 3,72

Qu = U1 - 2U2 + U3 = 4,31

Рисунок 1453

Таблица 3.2.2.-7. - Сводная таблица дисперсионного анализа (рандомизированная постановка с использованием трех доз на примере биологической активности гонадотропина хорионического)

Источник дисперсии (показатель)

Число степеней свободы (f)

Сумма квадратов

Средний квадрат Рисунок 1454

Наблюдаемое значение критерия Фишера Fнабл.

Критическое значение критерия Фишера Fкритич.

Препараты

1

1,41

1,41

Регрессия

1

58,44

58,44

243,5

> 7,13

(p = 0,01)

Непараллельность

1

0,51

0,51

2,13

< 4,02

(p = 0,05)

Квадратичность

1

0,54

0,54

2,25

< 4,02

(p = 0,05)

Разность квадратичностей

1

0,0002

0,0002

0,0008

< 4,02

(p = 0,05)

Постановки

k - 1 = 6 - 1 = 5 = fn.

60,9

12,18

Отклонение

N - 1 - fn. - m = 59 - 5 = 54

13,14

0,24

Итог

N - 1 - m = 59

74,04

n = 10 (число ответов в группе); N = 60 (общее число ответов в опыте); m = 0 (число утраченных и замененных значений).

Для этого на основании данных, представленных в таблице 3.2.2.-5 и 3.2.2.-6, а также поправочного коэффициента, вычисляют суммы квадратов источников дисперсии.

Поправочный коэффициент

Рисунок 1455;

Рисунок 1456;

Рисунок 1457;

Рисунок 1458;

Рисунок 1459;

Рисунок 1460;

Рисунок 1461;

Рисунок 1462;

Отклонение = итог - постановки = 74,04 - 60,9 = 13,14.

Значимость различий дисперсий проверяют с помощью критерия Фишера. Обязательным является выполнение требований для показателей Регрессия, Непараллельность, Квадратичность и Разность квадратичностей. Для Регрессии наблюдаемое значение критерия Фишера должно быть больше критического (p = 0,01), а для остальных показателей - меньше критического (p = 0,05).

Для того чтобы найти Fнабл. средние квадраты показателей делят на средний квадрат показателя Отклонение. Полученные результаты сравнивают с табличными критическими значениями критерия Фишера (таблица 3 Приложения). Число степеней свободы f1 = 1, а f2 = 54.

Дисперсионный анализ показал пригодность результатов опыта: статистическую значимость дозозависимости (Регрессия), параллельность и линейность двух линий регрессии (Непараллельность, Квадратичность и Разность квадратичностей).

Вычисление биологической активности и ее доверительных границ

Соотношение доз равно 2, следовательно I = lg2,0 = 0,3010;

t = 1,958788 + 2,429953 / f + 2,189891 / f2 +

+ 4,630189 / f3 + 1,398179 / f9 = 2,00

при f = 54 и p = 0,05;

Рисунок 1463;

Рисунок 1464;

Рисунок 1465;

Рисунок 1466;

Ожидаемая активность AU = 1000 МЕ/фл.

Рисунок 1467;

Биологическая активность

RU = 103,075 = 1188,50 МЕ/фл.;

C = E / (E - s2t2) = 58,44 / (58,44 - 0,24 · 2,002) = 1,017.

Логарифмические доверительные границы биологической активности испытуемого образца вычисляют по формуле:

Рисунок 1468.

Логарифмические доверительные границы биологической активности испытуемого образца составляют 0,0114 и 0,1411. Нижняя и верхняя доверительная граница составляет Рисунок 1469 и Рисунок 1470, т.е. 1026,6 МЕ/фл. и 1383,9 МЕ/фл. соответственно.

3.2.1. Рандомизированная постановка с использованием двух доз (на примере биологической активности гонадотропина хорионического) 3.2.3. Метод случайных блоков с использованием двух доз (на примере биологической активности окситоцина на петушке)