Внимание! Изменения, внесенные Решением Коллегии ЕЭК от 25.06.2024 N 75, в части дополнения общими фармакопейными статьями, вводятся в действие с 1 января 2025 года.
Решение Коллегии Евразийской экономической комиссии от 11.08.2020 N 100 (ред. от 25.06.2024) "О Фармакопее Евразийского экономического союза"

Определение стеринов (ГХ)

Определение проводят методом газовой хроматографии (2.1.2.27). Все операции проводят, защищая от влаги; растворы готовят непосредственно перед применением.

Испытуемый раствор. К стеринам, выделенным из испытуемого образца методом тонкослойной хроматографии, прибавляют свежеприготовленную смесь 0,04 мл хлортриметилсилана P, 0,1 мл гексаметилдисилазана P и 0,5 мл пиридина безводного P и выдерживают не менее 5 мин; используют жидкую фазу.

Раствор сравнения (а). К 9 частям стеринов, выделенных из рапсового масла P методом тонкослойной хроматографии, прибавляют 1 часть холестерина P. К полученной смеси добавляют свежеприготовленную смесь 0,04 мл хлортриметилсилана P, 0,1 мл гексаметилдисилазана P и 0,5 мл пиридина безводного P и выдерживают не менее 5 мин; используют жидкую фазу.

Раствор сравнения (б). К стеринам, выделенным из подсолнечного масла P методом тонкослойной хроматографии, прибавляют свежеприготовленную смесь 0,04 мл хлортриметилсилана P, 0,1 мл гексаметилдисилазана P и 0,5 мл пиридина безводного P и выдерживают не менее 5 мин; используют жидкую фазу.

Условия хроматографирования:

- колонка: из термостойкого кварца капиллярная, длиной от 10 м до 30 м и внутренним диаметром от 0,25 мм до 0,32 мм, заполненная поли[метил(95)фенил(5)]силоксаном P или поли(цианопропил)(7)(фенил)(7)(метил)(86)силоксаном P толщиной 0,25 мкм;

- газ-носитель: водород для хроматографии P или гелий для хроматографии P;

- линейная скорость газа-носителя: (30 - 50) см/с (водород) или (20 - 35) см/с (гелий);

- деление потока: 1:50 (водород) или 1:100 (гелий);

- температура колонки: 260 °C;

- температура блока для ввода проб: 280 °C;

- температура детектора: 290 °C;

- детектор: пламенно-ионизационный;

- объем вводимой пробы: по 1 мкл испытуемого раствора, растворов сравнения (а) и (б).

Идентификация пиков: на хроматограмме раствора сравнения (а) обнаруживаются четыре основных пика, соответствующие холестерину, брассикастерину, кампестерину и Рисунок 601; на хроматограмме раствора сравнения (б) обнаруживаются 4 основных пика, соответствующие кампестерину, стигмастерину, Рисунок 602 и Рисунок 603. Относительные времена удерживания пиков стеринов по отношению к пику Рисунок 604 приведены в таблице 2.1.8.26.-1.

Таблица 2.1.8.26.-1. - Относительные времена удерживания пиков стеринов по отношению к пику Рисунок 605 для двух различных колонок

Стерины

Поли(цианопропил)(7)(фенил)(7)-(метил)(86)силоксан

Поли[метил(95)фенил-(5)]силоксан

Холестерин

0,64

0,63

Брассикастерин

0,70

0,71

24-Метилен холестерин

0,79

0,80

Кампестерин

0,82

0,81

Кампестанол

0,83

0,82

Стигмастерин

0,87

0,87

Рисунок 606

0,93

0,92

Рисунок 607

0,95

0,95

Клеростерин

0,96

0,96

Рисунок 608

1

1

Ситостанол

1,01

1,02

Рисунок 609

1,03

1,03

Рисунок 610

1,09

1,08

Рисунок 611 <*>

1,13

1,12

Рисунок 612

1,18

1,16

Бетулин

1,4

1,4

--------------------------------

<*> В литературе данный стерин может быть также называться Рисунок 613.

Пик внутреннего стандарта (бетулин) должен быть четко отделен от пиков определяемых стеринов.

Идентифицируют пики, обнаруженные на хроматограмме испытуемого раствора.

Содержание каждого стерина в стериновой фракции испытуемого раствора рассчитывают в процентах по формуле:

Рисунок 614,

где: Si - площадь пика стерина на хроматограмме испытуемого раствора;

Рисунок 615 - сумма площадей всех пиков стеринов, указанных в таблице 2.1.8.26.-1, кроме пика бетулина.

При наличии указаний в частной фармакопейной статье содержание каждого стерина в стериновой фракции испытуемого образца в процентах рассчитывают по формуле:

Рисунок 616,

где S - площадь пика определяемого стерина на хроматограмме испытуемого раствора;

S0 - площадь пика бетулина на хроматограмме раствора сравнения;

m - масса навески испытуемого образца в граммах;

mS - масса навески добавленного бетулина P в миллиграммах.

Отделение стериновой фракции (ТСХ) Метод 2