7. Установление характеристик лекарственного препарата

65. Установление характеристик лекарственного препарата необходимо выполнять в соответствии с указаниями главы 31 настоящих Правил.

66. Установление характеристик лекарственного препарата, содержащего генетически модифицированные клетки (изолированного или в комбинации с медицинским изделием), является обязательным видом исследований. Исследования по установлению характеристик направлены на выявление критических показателей качества (молекулярных и биологических характеристик, оказавшихся необходимыми для обеспечения постоянства), а также безопасности и эффективности такого препарата. Исследования по установлению характеристик лекарственного препарата используются для обоснования совокупности испытаний выпускающего контроля.

67. При проведении исследований необходимо использовать широкий спектр квалифицированных молекулярных, биологических и иммунологических методов в отношении установления следующих характеристик лекарственного препарата в зависимости от обстоятельств:

а) идентификация (подлинность) и жизнеспособность клеток;

б) определение фенотипа и морфологии клеток;

в) оценка гетерогенности клеточной популяции (например, доля субпопуляций);

г) способность к пролиферации и (или) дифференцировке генетически модифицированных клеток;

д) оценка функциональности клеток (отличной от пролиферации и дифференцировки) (если применимо);

е) оценка эффективности трансдукции (трансфекции) (например, доля трансдуцированных клеток);

ж) анализ последовательности и целостности трансгена;

з) оценка генетической стабильности после пролиферации in vitro и (или) дифференцировки;

и) подлинность и активность продукта экспрессируемого гена;

к) количество копий вектора на трансдуцированную или трансфицированную клетку;

л) профиль интеграции вектора (если применимо);

м) элиминация вектора или трансгенов (если применимо);

н) высвобождение вектора из клеток;

о) способность вектора к репликации и возможность реактивации (если только это не продемонстрировано на уровне исходного материала);

п) персистенция инструментов редактирования генома в клетках;

р) целевые и нецелевые генетические модификации.

68. Необходимо изучить и проанализировать данные о высвобождении вектора и (или) репликации вектора в отношении риска выделения в окружающую среду и мобилизации вектора. Возможность реактивации вектора необходимо оценить и включить в анализ риска.

69. Количество копий вектора на трансдуцированную или трансфицированную клетки необходимо обосновывать в отношении данных о безопасности и целевого назначения продукта. Чтобы рассмотреть риск инсерционного мутагенеза, профиль интеграции интегрирующихся векторов или плазмид необходимо изучить в отношении известных онкогенов и генов - супрессоров опухолей (если применимо). Для идентификации профиля интеграции установленных клинически клонов проводится скрининг интеграции вектора у пациентов после введения лекарственного препарата (если применимо).

70. Ограниченное исследование участка интеграции допускается в случае предоставления детального обоснования возможности такого подхода и наличия расширенных данных по характеристике распределения участка вставки от того же вектора с использованием тех же клеток и промотора и др., но с другой последовательностью трансгена.

71. В случаях если генетически модифицированные клетки обладают пролиферативным потенциалом и предназначены для поддержания активности in vivo по восполнению популяции или ее увеличению, необходимо изучить клональность и целостность хромосом генетически модифицированных клеток.

72. Эффективность трансдукции (трансфекции) и экспрессии трансгена (или в случае редактирования генома - доля генетически модифицированных клеток) необходимо обосновать в соответствии с данными о клинической эффективности.

73. Необходимо подробно охарактеризовать однородность и генетическую стабильность генетически модифицированных клеток, а также надлежащим образом документировать любые наблюдаемые непредвиденные изменения морфологии клеток, их функций и поведения (например, характеристик миграции генетически модифицированных клеток при сравнении с первоначальными немодифицированными клетками). Любые непредвиденные модификации фенотипа, свойств пролиферации или дифференцировки и функциональной активности клеток необходимо изучить и рассмотреть исходя из целевого назначения лекарственного препарата. Кроме того, необходимо изучить мишени индуцированного модификацией (вызванной целевыми клетками) повышения иммунной активности (например, при иммунотерапии рака).

74. Необходимо установить характеристики гетерогенности в отношении субпопуляций клеточных типов (например, для T-клеток - CD4+, CD8+ или T-клетки памяти, для генетически модифицированных CD34+ клеток релевантной субпопуляцией будут короткоживущие и долгоживущие клетки-предшественники).

75. В отношении клеток, модифицируемых с использованием инструментов редактирования генома, необходимо идентифицировать индуцированные нецелевые изменения с использованием, по меньшей мере, одного чувствительного и подробно охарактеризованного анализа на клеточном типе, который будет использоваться в терапевтических целях, или в суррогатных условиях (например, на здоровых донорских клетках). Допускается использовать соответствующие инструменты для скрининга in silico. Однако при этом не все нецелевые мишени, идентифицированные при помощи такого подхода, могут в последующем возникнуть или быть верифицированы на клетках, в конечном итоге используемых для редактирования генома. В связи с этим такую совокупность возможных геномных участков в последующем необходимо проанализировать при помощи глубокого секвенирования (или другого соответствующего метода) на фактическом клеточном типе, который будет использоваться в медицинской практике и производиться в соответствии с предлагаемым протоколом и уровнем экспрессии гена или дозой нуклеазы. Необходимо проанализировать достигнутую чувствительность и примененные контроли качества, особенно при наличии отрицательных результатов исследования. Необходимо также учесть возможное возникновение крупных делеций, хромосомных транслокаций и других крупномасштабных геномных изменений на основании фактического профиля целевых и нецелевых эффектов, верифицированных на обрабатываемых клетках, и оценить связанный с ним потенциальный риск. Оценка риска будет также зависеть от целевых клеток-мишеней.

76. Таргетное редактирование генома необходимо подробно охарактеризовать, чтобы установить, в какой степени целевой участок правильно редактируется и произошли ли запланированные изменения в области целевого участка генома. При наличии различий в исходном материале между сериями (например, аутологичные клетки) необходимо оценить потенциальные различия при нецелевых эффектах.

77. Поскольку редактирование генома представляет собой быстро развивающуюся область, в отношении стратегии испытаний и оценки целевых и нецелевых изменений допускается применять риск-ориентированный подход на основании актуальных научных знаний.

78. Необходимо установить аспекты, значимые для приживления, экспансии in vivo или дифференцировки клеток in vivo (при необходимости), а также выживания модифицированных клеток (в том числе долгосрочного), и при необходимости включить эти параметры в спецификации на выпуск.