10.3.1. Иммунные клетки (CAR- и TCR-модифицированные T-клетки, NK-клетки)

127. В отношении CAR- и TCR-модифицированных иммунных клеток необходимо изучить потенциал целевой и нецелевой токсичности (насколько это допускается соответствующей животной моделью или с помощью альтернативного подхода с использованием комбинации анализов in silico и in vitro). Альтернативный подход для изучения целевой токсичности обычно показан для TCR- и CAR-модифицированных иммунных клеток, содержащих scFv (одноцепочечный вариабельный фрагмент), который распознает исключительно эпитоп клеток человека. Альтернативный подход должен включать детальный анализ экспрессии антигена-мишени в органах, тканях и клетках человека.

128. Исследование экспрессии антигена-мишени выполняется путем анализа клеток и тканей здоровых индивидуумов. Анализ базы данных экспрессии генов и научные данные позволяют выяснить способность к различной экспрессии антигена-мишени при определенных патофизиологических состояниях. Необходимо подтвердить экспрессию опухоль-специфичного антигена в целевых клетках. Клетки человека с экспрессией антигена-мишени или без нее необходимо испытать in vitro на предмет распознания иммунными клетками с CAR или модифицированным TCR.

129. В случае если для оценки целевой токсичности иммунных клеток с модифицированным CAR используется гомологичная животная модель с использованием другого scFv, который распознает ортологичный эпитоп, требуется осторожность при транслировании подобных данных на человека, поскольку профиль экспрессии и содержание экспрессируемого антигена-мишени у человека и животных, а также аффинность к антигену-мишени двух scFv могут различаться. Необходимо учитывать, что подобная модель не позволяет оценить потенциальную нецелевую токсичность ввиду использования другого scFv.

130. Для оценки потенциальной нецелевой токсичности иммунных клеток с модифицированным TCR выбранная стратегия адаптируется под ожидаемую вероятность перекрестной реактивности TCR. Например, ожидаемая вероятность того, что TCR, полученный от человека, будет перекрестно реагировать с собственными пептидами человека, является низкой за счет индукции центральной толерантности, которая должна элиминировать T-клетки с высокой аффинностью TCR к собственным пептидам человека. Для TCR, получаемых из ксеногенных источников, и высокоафинных TCR, с другой стороны, нельзя ожидать наличия низкого риска перекрестной реактивности. В связи с этим требуется более жесткая стратегия испытаний в отношении подобных TCR.

131. Испытания иммунных клеток с модифицированным TCR на нецелевую токсичность должны включать в себя испытания in vitro на связывание иммунных клеток с модифицированным TCR с собственными пептидами, представляемыми на том же HLA-аллеле, что и таргетный пептид. Выбранные собственные пептиды и масштаб исследования необходимо обосновать. Более того, необходимо изучить, имеет ли таргетный пептид общность с другими гомологичными или аналогичными белками.

132. Если TCR обладает определенной вероятностью перекрестного реагирования, необходимо определить минимальный распознаваемый мотив таргетного пептида и использовать его для анализов in silico, оценивающих перекрестную реактивность. Если потенциальные перекрестно реагирующие пептиды были выявлены in silico, клетки, экспрессирующие соответствующий белок и (или) представляющие потенциально перекрестно реагирующий пептид, необходимо проанализировать на предмет распознавания иммунными клетками с модифицированным TCR. Если перекрестную реактивность исключить невозможно, необходимо выполнить оценку риска на основании профиля экспрессии белка, соответствующего потенциально перекрестно реагирующему пептиду, и аффинности TCR в отношении потенциально перекрестно реагирующего пептида.

133. Чтобы получить сведения о потенциальной перекрестной реактивности TCR с другими HLA-аллелями, необходимо провести скрининг на HLA-аллореактивность.

134. В отношении T-клеток с модифицированным TCR необходимо рассмотреть потенциальное ошибочное соединение внедренных цепей TCR и эндогенных TCR. Необходимо описать и обосновать стратегии дизайна внедряемых цепей TCR, чтобы снизить потенциал ошибочного соединения.