4.3.1. Процедуры заготовки клеток

44. Все процедуры приготовления клеток необходимо обосновать с точки зрения их целевого назначения.

45. Необходимо избегать ненадлежащего обращения с клетками или тканями и их неправильную обработку, поскольку это может повредить или нарушить целостность и (или) функциональную активность клеток, тем самым приведя к терапевтической неэффективности. Микробиологический контроль является основополагающим аспектом контроля процесса производства и оценки качества всех соматотерапевтических лекарственных препаратов. Если выполнимо, на выбранных стадиях производства необходимо осуществлять мониторинг культивирования клеток in vitro. Культуру необходимо проверять на предмет любой микробной контаминации в соответствии с процедурой культивирования и характеристиками роста клеток.

46. После того, как соответствующие контроли были выполнены и (или) внедрены, биологическую жидкость (ткань, орган) допускается подвергать следующим манипуляциям:

а) диссоциация органов или тканей. Необходимо описать и валидировать процедуру получения клеток из органа или ткани (с точки зрения вида фермента, сред и т.д.). Необходимо учитывать степень дезинтеграции, применяемую к ткани, чтобы сохранить планируемую функциональную целостность клеточного препарата и минимизировать клеточные примеси в препарате (клеточный дебрис, перекрестную контаминацию другими типами клеток);

б) выделение интересующей клеточной популяции. Необходимо описать любую процедуру, используемую для выделения и (или) очистки интересующей клеточной популяции. Ее эффективность рассматривается в совокупности с целевым назначением, а метод (методы) должен быть валидирован;

в) культивирование клеток. Во время культивирования клеток in vitro необходимо обратить внимание на обеспечение приемлемого роста выделенных клеток и манипуляции с ними. Чтобы сохранить целостность и контролировать функциональную активность клеток, необходимо правильно спланировать стадии производства. Процедуры любой манипуляции необходимо подробно описывать в документах по производству и осуществлять тщательный мониторинг процессов производства с использованием специальных контролей. Необходимо четко установить и валидировать продолжительность культивирования клеток и максимальное число пассажей клеток. Необходимо определить значимые генотипические и фенотипические характеристики первичных культур клеток, сформированных клеточных линий в соответствии с главой 1 настоящих Правил и производных клеточных клонов, а также определить их стабильность с точки зрения продолжительности жизни культуры. Необходимо подтвердить постоянство и воспроизводимость процесса культивирования клеток и оптимизировать условия культивирования, включая среды и продолжительность культивирования, с точки зрения предлагаемой клинической (терапевтической) функции клеток.

Необходимо отдельно рассмотреть потенциал роста клеток в ответ на факторы роста, поскольку субпопуляции клеток могут приобретать преимущество в росте при определенных условиях культивирования in vitro;

г) модификация клеток. На клетки можно воздействовать различными методами (физическими, химическими или молекулярно-генетическими). Необходимо всесторонне описать метод, используемый для модификации клеток. В случае генетической модификации клеток необходимо соблюдать требования, установленные главой 32 настоящих Правил;

д) культивирование клеток внутри или на поверхности матрикса, скаффолда, медицинского изделия или каркаса. Если клетки выращиваются внутри или на поверхности матрикса, скаффолда, медицинского изделия либо каркаса, качество комбинированного соматотерапевтического лекарственного препарата определяется главным образом надлежаще контролируемым процессом производства. В случае производства комбинированных соматотерапевтических лекарственных препаратов процесс культивирования клеток необходимо тщательно валидировать, принимая во внимание влияние медицинского изделия на рост, функцию и целостность клеток. Необходимо также учитывать влияние, которое могут оказать клетки на изделие (например, скорость деградации), в соответствии с указаниями раздела 5 настоящей главы.