7.3. Активность

86. Для оценки активности генетически модифицированных клеток необходимо использовать биологические испытания для определения их функциональных свойств (если применимо) и свойств, достигаемых при помощи генетической модификации.

87. Испытания на активность должны позволять получить (насколько это возможно) количественные сведения о целевой функции клетки и экспрессии трансгена. Выбор испытания на активность при выпускающем контроле качества необходимо обосновать на основании исследований по установлению характеристик продукта и его пригодности в качестве выпускающего контроля качества с учетом практических ограничений (например, объем доступного материала или ограниченный срок годности лекарственного препарата). Испытания на биологическую активность на тканях животных, культивируемых ex vivo, или на животных проводятся только в тех случаях, когда невозможно разработать подходящий метод in vitro, поскольку испытания на тканях животных или на животных имеют высокую вариабельность, ограниченную ценность для прогнозирования биологической активности лекарственного препарата у человека и не соответствуют принципам 3 R (замена, улучшение и сокращение).

88. Необходимо создавать референтную серию клеток с назначенной активностью и использовать ее для калибровки испытаний, если это выполнимо. В отношении инструментов, используемых для генетической модификации клеток (например, векторов, рекомбинантных белков), также необходимо создать референтную серию клеток.

89. Испытания на активность не должны ограничиваться оценкой функциональной активности клеток, а также должны включать в себя другие значимые испытания (например, оценку жизнеспособности клеток). Необходимо предусмотреть выпускающие испытания с оценкой потенциала пролиферации, дифференцировки и персистенции после введения лекарственного препарата (при необходимости).

90. Испытания на активность продуктов, содержащих генетически модифицированные T-клетки против опухолевых клеток (например, CAR-T-клетки), должны основываться на цитотоксическом потенциале T-клеток. В связи с этим результаты анализа включают в себя данные о фактической гибели опухолевых целевых клеток или индукцию внутриклеточных путей и нарушение целостности мембраны целевых клеток, в отношении которых показано, что такое нарушение целостности мембраны ведет к необратимой их гибели. Суррогатными показаниями в отношении биологической активности продуктов CAR-T-клеток может быть секреция специфических цитокинов либо цитотоксических молекул или экспрессия T-клетками маркеров активации или дегрануляции при условии, что подтверждена связь с гибелью клеток-мишеней. Если аутологичный опухолевый материал не может быть использован в качестве объекта исследования, необходимо обосновать применимость суррогатного материала.