5.1. Определение специфической активности. Общие принципы

5.1. Определение специфической активности.

Общие принципы

Для определения специфической активности препаратов должны использоваться информативные лабораторные методы, позволяющие получать данные, коррелирующие с результатами применения препаратов у людей.

Принципы оценки активности препаратов, предназначенных для активной иммунизации человека (вакцины, анатоксины), должны быть основаны на определении степени иммунологического ответа у экспериментальных животных, иммунизированных данными препаратами.

При изучении специфической активности новых препаратов и последующей разработке требований к ним необходимо основываться на определенных принципах, излагаемых ниже.

5.1.1. При выборе вида лабораторных животных и методов их заражения необходимо стремиться к тому, чтобы степень восприимчивости животных к инфекционному агенту или токсину и патогенез инфекционного процесса были максимально близки к таковым у человека.

В процессе доклинического изучения целесообразно использовать несколько видов животных.

5.1.2. Испытания следует проводить на животных одной линии, отличающихся меньшими индивидуальными различиями в иммунореактивности и чувствительности к инфекционным агентам и токсинам.

5.1.3. Специфическую активность препаратов, предназначенных для активной иммунизации, следует оценивать по устойчивости вакцинированных животных к специфическому инфекционному агенту или токсину и по уровню специфических антител в крови. В случае, когда при формировании невосприимчивости клеточные механизмы играют определяющую или паритетную роль, следует изучить клеточный механизм специфического иммунного ответа.

Оценку специфической активности сывороточных препаратов следует проводить на животных путем определения их защитных свойств в отношении специфического инфекционного агента или токсина. При этом одновременно целесообразно использовать также доступные пробирочные методы и определить степень корреляции результатов, получаемых в этих опытах и опытах на животных.

5.1.4. Испытание иммуногенности препаратов следует, как правило, проводить при однократном введении. Исключение могут составлять препараты, однократное введение которых неэффективно.

5.1.5. Дозы антигенов для иммунизации животных должны избираться с таким расчетом, чтобы испытание напряженности иммунитета проводилось введением достаточно большой дозы инфекционного агента или токсина.

Необходимо избегать применения чрезмерно больших доз антигенов, приводящих к гипериммунизации и нивелированию показателей иммуногенности препаратов с разной активностью.

5.1.6. Испытание напряженности иммунитета следует проводить в период развития максимального его уровня.

5.1.7. Специфическую активность препаратов необходимо оценивать количественно в сравнении с применяемыми в практике.

Для получения количественной характеристики специфической активности препарата обязательным условием является проведение исследований на достаточно большом числе животных и статистическая обработка получаемых результатов.

При проведении испытаний следует использовать препараты сравнения. В качестве препаратов сравнения используют препараты (серии), наиболее полно охарактеризованные по показателю активности в многократно повторенных экспериментах. При разработке усовершенствованных препаратов в качестве препаратов сравнения должны быть использованы препараты-аналоги из числа применяемых в практике; при наличии утвержденных стандартных образцов активности использование последних при оценке активности модифицированных препаратов является обязательным.

5.1.8. При выборе препаратов сравнения следует учитывать наличие в них адъютантов. Одним из основных и принципиальных условий правомерности количественного сопоставления активности двух препаратов является параллелизм линий, выражающих зависимость между дозой введенного антигена и полученным иммунологическим эффектом ("линии регрессии").

В качестве препаратов сравнения необходимо применять лиофилизованные препараты, длительно сохраняющие свои свойства без изменений.

5.1.9. Специфическую активность живых вакцин следует также оценивать по содержанию живых бактерий или инфекционных единиц вируса. Количество живых бактерий или вирусных инфекционных единиц в живых вакцинах определяют с помощью общепринятых или специально разработанных и аттестованных методов с использованием соответствующих субстратов (питательные среды - для бактерийных вакцин, клеточные культуры - для вирусных вакцин).

5.1.10. Для вакцинных препаратов, не имеющих адекватных лабораторных моделей, характеристику специфической активности получают путем изменений в них с помощью иммунологических и биохимических методов специфических антигенов, с которыми связана иммуногенная активность.

5.1.11. С учетом сложности оценки специфической активности препаратов и трудности прогнозирования надежности и информативности (степень корреляции результатов с данными, получаемыми у людей) какого-либо одного метода, при экспериментальном доклиническом изучении новых препаратов следует для оценки специфической активности использовать несколько методов с последующим их включением в нормативную документацию.

5.1.12. При разработке оценочных методов должны быть четко регламентированы все элементы, влияющие на получаемые результаты (характеристика животных, условия и техника постановки опытов, методы статистической обработки с расчетом доверительных границ полученных показателей). Крайне важно метрологическое обеспечение технических операций, связанных с использованием различных средств измерения, включающих пипетки, мерную посуду, шприцы, измерительную аппаратуру, и использование стандартизированных реактивов и других материалов. Требования к метрологическому обеспечению должны быть регламентированы соответствующими нормативными документами.