Определение общих и глюкозоположительных колиформных бактерий титрационным методом

Определение общих и глюкозоположительных колиформных

бактерий титрационным методом

Ускорение анализа достигают использованием на первом этапе анализа в качестве среды накопления глюкозопептонной среды. Этот прием позволяет в одном посеве определять ОКБ и ГКБ, что возможно благодаря способности ОКБ ферментировать как лактозу, так и глюкозу как основной биохимический признак семейства Enterobacteriaceae. Кроме того, накопление колиформных бактерий в среде с глюкозой происходит более интенсивно за счет быстрого разложения глюкозы по сравнению с лактозой, что сокращает время анализа на сутки.

Выполнение анализа

Глюкозопептонную среду готовят так же, как лактозопептонную, заменив углеводлактозу на глюкозу МУК 4.2.1018-01.

Исследуемый объем воды 300 мл засевают в три емкости с 10 мл концентрированной глюкозопептонной среды по 100 мл в каждую емкость. Посевы инкубируют при температуре (37 +/- 1 ) °C в течение 24 часов.

Отсутствие изменения среды позволяет дать отрицательный ответ.

Из посевов в среду накопления, где отмечено помутнение и газообразование или только помутнение, производят высев на сектора среды Эндо с таким расчетом, чтобы получить изолированные колонии. Посевы на среде Эндо инкубируют при температуре (37 +/- 1) °C в течение 16 - 18 часов.

При обнаружении роста на секторах, характерных для колиформных бактерий колоний, выполняют оксидазный тест одним из способов (нанесением штрихом колонии каждого типа на полоску фильтровальной бумаги, смоченной реактивом; нанесением капли реактива на часть сектора).

Отрицательный ответ дают в следующих случаях:

- в среде накопления нет признаков роста;

- на секторах среды Эндо нет роста;

- на секторах среды Эндо выросли не характерные для колиформных бактерий колонии (прозрачные, с неровными краями, расплывчатые);

- все колонии на секторе оказались оксидазоположительные.

В протоколе анализа сообщают: отсутствие ОКБ в 300 мл и отсутствие ГКБ в 300 мл.

При обнаружении на секторах роста типичных оксидазоотрицательных колоний - темно-красных, красных, с металлическим блеском или без него - дают ответ о наличии ОКБ и ГКБ в пробе воды. В протоколе анализа сообщают: обнаружение ОКБ в 300 мл, обнаружение ГКБ в 300 мл.

Если на секторах не выявлен рост типичных колоний, а обнаружены розовые оксидазоотрицательные колонии и при этом в среде накопления установлено газообразование - дают ответ о наличии ГКБ. В протоколе анализа сообщают: обнаружение ГКБ в 300 мл.

Данный анализ является качественным. При необходимости получения количественного результата производят посев в глюкозопептонную среду трех объемов по 100 мл, трех объемов по 10 мл и трех объемов по 1 мл и устанавливают в каждой емкости наличие ОКБ и ГКБ, как указано выше.

При определении ОКБ учитывают емкости, при высеве из которых на среде Эндо обнаружены типичные колонии.

При определении ГКБ учитывают в сумме емкости, где на секторах среды Эндо обнаружены типичные колонии ОКБ, а также розовые, при газообразовании в среде накопления выдают ответ: НВЧ КОЕ ОКБ в 100 мл или НВЧ КОЕ ГКБ в 100 мл.

Результаты определяют по таблице МУК 4.2.1018-01.

Примечания. В соответствии с СанПиН единицей измерения ОКБ ГКБ и ТКБ является 100 мл, а норматив по этим показателям - отсутствие колиформных бактерий в 300 мл.

Норматив - это научно обоснованная величина, указывающая (при его соблюдении) на вероятность обеспечения эпидемической безопасности водопользования в отношении кишечных инфекций.

Единица измерения 100 мл условно принята для выражения количественного результата в целях сопоставления данных на международном уровне, а также при исследовании воды различных объектов и при работе разными методами (мембранным или титрационным). При работе титрационным методом результат может быть высчитан только на 100 мл в соответствии с международными статистическими таблицами расчета НВЧ (наиболее вероятного числа) микроорганизмов.